В основе иммуноферментного анализа лежит иммунная реакция антигена с антителом, а присоединение к антителам ферментной метки позволяет учитывать результат реакции антиген-антитело по появлению ферментативной активности или по изменению ее уровня.
Какие инфекции можно выявить методом ИФА
В основном ИФА применяется для диагностики сифилиса (в комплексе с другими реакциями), ВИЧ-инфекции, вирусных гепатитов. Имеет ограниченное значение для диагностики хламидийной инфекции, цитомегаловирусной инфекции и других герпетических инфекций. Метод ИФА используется также для определения антител при различных инфекционных заболеваниях, уровня гормонов, аутоантител и различных маркеров онкологических заболеваний.
Исследование наличия и уровня антител различных классов в некоторых случаях помогает определить стадию инфекционного процесса.
Преимущества ИФА относительно других методов обнаружения антигенов и антител:
— высокая чувствительность, которая, составляющая 90%;
— стабильность при хранении всех ингредиентов, необходимых для проведения ИФА (год и более);
— быстрота и удобство проведения диагностической реакции;
— возможность использовать минимальные объемы исследуемого материала;
— возможность автоматизации всех этапов проведения реакции;
— небольшая стоимость диагностических наборов;
— возможность ранней диагностики инфекции;
— унифицированность и пригодность для массовых обследований;
— легкость в отслеживании динамики развития процесса инфекционного заболевания.
Метод иммуноферментного анализа используется для определения наличия антигенов возбудителей различных инфекций и для определения наличия антител классов (IgA, IgM, IgG) к антигенам различных возбудителей (вирусные гепатиты, ВИЧ, сифилис, TORCH, хламидиозы, паразитозы). С помощью ИФА можно определить антитела к любой инфекции, при условии, что организм их выработал. Этот метод позволяет различать острые и хронические формы заболеваний, выделять стадию заболеваний и выявлять практически здоровых носителей и контролировать вакцинацию.
Для постановки диагноза по методу ИФА используют лабораторные тесты для идентификации возбудителя, инструментальные методы обследования и клиническую диагностику. Надо учитывать, что только по наличию тех или иных антител не может быть поставлен достоверный диагноз заболевания. Необходимо одновременно выявлять антитела к возбудителю методом ИФА и выявлять возбудителя методом ПЦР или другими методами.
ДИАГНОСТИКА АУТОИММУННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
Антинуклеарные антитела— это аутоантитела к антигенам ядра клеток. Они образуют иммунные комплексы и откладываются на базальных мембранах различных тканей и органов, тем самым вызывая воспаление и повреждение тканей и сосудов. Образование таких антител характерно для системных аутоиммунных заболеваний. Исследование на антинуклеарные антитела проводится если врача подозревает системное аутоиммунное заболевание.
Антитела к двухспиральной ДНК образуются при системных аутоиммунных поражениях соединительной ткани. Эти иммунные комплексы откладываются на тканях, стенках сосудов и вызывают их повреждение. Антитела к двухспиральной ДНК специфичны для системной красной волчанки.
Качественное и полуколичественное иммуноферментное определение специфических антител класса IgG к цитрулиновому пептиду. Тест система предназначена для диагностики ревматоидного артрита различных стадий, в т.ч. начало заболевания, когда клинические проявления слабо выражены. Эффективность теста для пациентов с клинически подтвержденным ревматоидным артритом составляет от 78 до 88%.
Ревматоидный фактор обнаруживают при ревматоидном артрите, особенно при наиболее частой и распространенной форме хронического воспаления суставов, именуемой синовиит. 75-80% больных ревматоидным артритом имеют ревматоидный фактор, однако, он не специфичен для ревматоидного артрита так как обнаруживается у здоровых лиц и при ряде других заболеваний.
ANCA скрин— определение аутоантител к цитоплазматическим антигенам нейтрофилов (протеиназа 3, миелопероксидаза ). Анализ назначают при подозрении на системные васкулиты, гломерулонефрит.
Все перечисленные исследования доступны в лаборатории клинической иммуногенетики института
Все вышеназванные анализы и методы диагностики доступны всем, без исключения, пациентам, обратившимся в отделение лабораторной диагностики клиники.
Методом ИФА можно определить уровень гормонов, иммуноглобулинов, иммунологических комплексов и других биологически активных веществ. Материалом для исследования может служить кровь (ИФА крови), спинномозговая жидкость, содержимое стекловидного тела, околоплодные воды и т.д.
Преимущества, которыми располагает ИФА по сравнению с другими методами детекции антигенов и антител:
Метод иммуноферментного анализа используется для определения наличия антигенов возбудителей различных инфекций и для определения наличия антител классов (IgA, IgM, IgG) к антигенам различных возбудителей (вирусные гепатиты, ВИЧ, сифилис, TORCH, хламидиозы, паразитозы). С помощью ИФА можно определить антитела к любой инфекции, при условии, конечно, что организм их выработал. Этот метод позволяет различать острые и хронические формы заболеваний, выделять стадию заболеваний и выявлять практически здоровых носителей и контролировать вакцинацию. Необходимо заметить, что наличие антител в сыворотке крови или в патологическом материале может свидетельствовать лишь о контакте организма с возбудителем в настоящее время или в прошлом.
Для постановки диагноза, ИФА диагностики, используют лабораторные тесты для идентификации возбудителя, инструментальные методы обследования и клиническую диагностику (клинический опыт врача). Естественно, что только по наличию тех или иных антител не может быть поставлен достоверный диагноз заболевания. Необходимо одновременно выявлять антитела к возбудителю методом ИФА и выявлять возбудителя методом ПЦР (полимеразная цепная реакция) или другими методами.
ИФА и ПЦР: просто о сложных лабораторных методах диагностики инфекций
Опубликовано 29 ноября 2014 пользователем a.ultanbay
В лабораторной диагностике существует множество методов выявления необходимого элемента в биоматериале. Для диагностики инфекционных заболеваний чаще всего используют два принципиально разных метода: ИФА и ПЦР. Мы предлагаем Вам ознакомиться с данными методами, чтоб понять плюсы и минусы каждого из них.
ПЦР – один из самых наукоемких методов. Он обнаруживает ДНК микроорганизма. Генетический материал индивидуален для любого микроба, а это значит, что метод обладает самой высокой специфичностью и не может «обознаться». Принцип ПЦР заключается в том, что в пробирке происходит многократное удвоение искомого генетического кода. В случае присутствия даже незначительного количества этого кода, произойдет увеличение его количества, и анализатор сможет «уловить» его наличие. Таким образом, ПЦР – «золотой стандарт» выявления инфекционных агентов. Однако, у этого метода есть и свои минусы. Во-первых, в отличие от ИФА, ПЦР может сказать о наличии возбудителя только в месте взятия биоматериала, которое ограничено мазком (например, с уретры или из носа). Во-вторых, за счет своей высокой чувствительности, ПЦР может обнаружить даже мертвые частицы микробов, что наблюдается сразу после лечения. В таком случае, результат будет ложноположительный.
Резюмируя вышесказанное, приведем таблицу сравнения этих двух методов друг с другом:
Иммуноферментный анализ (ИФА) — один из видов иммунохимического анализа. Он основан на высокоспецифической иммунологической реакции антигена (АГ) с соответствующим антителом (АТ) с образованием иммунного комплекса. При этом один из компонентов конъюгирован с ферментом. В результате реакции фермента с хромогенным субстратом образуется окрашенный продукт, количество которого можно определить спектрофотометрически.
Любой вариант ИФА содержит 3 обязательные стадии:
В реакции участвуют:
Твердая фаза
В качестве твердой фазы для проведения ИФА можно применять различные материалы: полистирол, поливинилхлорид, полипропилен и другие. Твердой фазой могут служить стенки пробирки, 96-луночные и др. планшеты, шарики, бусины, а также нитроцеллюлозные и другие мембраны, активно сорбирующие белки.
Антигены и антитела
АГ и AT, используемые в ИФА, должны быть высокоочищенными и высокоактивными. АГ должны обладать высокой антигенностью, оптимальной плотностью расположения и количеством антигенных детерминант. Чувствительность ИФА зависит от концентрации, активности и специфичности используемых антител. Используемые АТ могут быть поли- или моноклональными, различного класса (IgG или IgM) и подкласса (IgG1, IgG2). Чувствительность и специфичность метода повышается при использовании моноклональных антител. В этом случае появляется возможность обнаруживать низкие концентрации АГ (AT) в образцах.
Ферментные маркеры: наибольшее применение нашли пероксидаза хрена (ПХ), щелочная фосфатаза (ЩФ) и β-D-галактозидаза.
Субстраты
Выбор субстрата, в первую очередь, определяется используемым в качестве метки ферментом, так как реакция «фермент-субстрат» высокоспецифична.
Классификация ИФА
В основу классификации методов ИФА положено несколько подходов:
1 — по типу реагентов, присутствующих на первой стадии ИФА:
2 — по принципу определения исследуемого вещества:
3 — по типу результатов:
Конкурентный ИФА
Конкурентный ИФА для определения антител: искомые антитела и меченые ферментом антитела конкурируют друг с другом за антигены, сорбированные на твердой фазе.
Неконкурентный «сэндвич» – вариант ИФА
Основным достоинством метода является высокая чувствительность, превосходящая возможности других схем ИФА.
Качественный анализ часто используют при скрининговых исследованиях и диагностике инфекционных заболеваний. Результат исследования определяется при сравнении его оптической плотности с расчетной величиной критической оптической плотности (ОПкрит., «Cut-off»).
Формулу для расчета «Cut-off» указывают в инструкции к тест-системе. В расчете «Cut-off» могут участвовать как усредненные значения оптических плотностей положительных и отрицательных контролей, так и оптическая плотность специального контрольного образца — контроля уровня среза. Если оптическая плотность образца выше, чем Cut-off, образец считается положительным на специфические антитела.
Для полуколичественного варианта проведения методики рассчитывают отношение между средней оптической плотностью образца и оптической плотностью Cut-off.
Образцы рассматриваются как:
Сомнительные результаты анализа нельзя однозначно интерпретировать и для уточнения результата необходимо повторить обследование через 1–2 недели.
Анализ крови на гормоны, норма и расшифровка результатов показателей
Гормоны – это биологически активные вещества, которые вырабатываются эндокринной системой. Они отвечают за работу большинства жизненно важных органов, регулируют рост и обмен веществ. Хотя их содержание в кровеносной системе, по сравнению с другими компонентами, незначительное, они играют одну из ключевых ролей в организме. Различные гормоны выполняют разные функции, они могут как дополнять друг друга, так и вызывать негативный эффект. Для того, чтобы наш организм нормально функционировал, его гормональный фон должен находиться в равновесии. Отклонения в ту или иную сторону незамедлительно приводят к расстройствам, а иногда даже к серьезным патологиям. Гормональные нормы – это не постоянная единица, их процентное содержание зависит от пола, возраста и ряда других факторов.
Общее определение
Анализ крови на гормоны позволяет выявить, не нарушен ли гормональный баланс. Сегодня отмечается рост эндокринных заболеваний, вызванных расстройством функций желез внутренней секреции. Чтобы предотвратить негативные последствия, своевременно начав терапию, рекомендовано регулярно проверять свой гормональный фон. Это можно сделать в нашем многопрофильном медицинском центре «ВЫМПЕЛ-МЕДЦЕНТР». Высококвалифицированные специалисты, в распоряжении которых находится лучшее диагностическое оборудование, помогут выявить проблемы в работе организма на самых ранних стадиях.
Когда назначается исследование гормонального фона
Практически во всех жизненно важных процессах человеческого организма так или иначе принимают участие гормоны. Начиная с самого рождения, они регулируют здоровье человека, его психоэмоциональное состояние и жизнь в целом. За счет этих биологически активных веществ человек приспосабливается к изменениям окружающей среды, вступает в отношения, заводит детей, другими словами, нормально существует. Нарушение же гормонального баланса может иметь самые серьезные последствия.
Анализ крови на гормоны просто так не назначается. То есть при плановом осмотре делать исследование эндокринной системы никто не будет. Подобная диагностика, как правило, проводится исключительно по направлению врача, который имеет подозрение на нарушения в работе щитовидной железы, сахарный диабет или другое эндокринное заболевание. Помимо этого, такой анализ часто назначается девушкам и женщинам, страдающим постоянными сбоями менструального цикла, бесплодием, угревой сыпью, периодическими выкидышами и ожирением.
Как правильно сдавать
Кровь на анализ берется из вены. В зависимости от симптоматики доктор выделяет группу гормонов, которые нужно проверить. Желательно за 12 часов полностью ограничить физические и психоэмоциональные нагрузки, не употреблять спиртные напитки, медпрепараты и еду, содержащую йод.
Особого внимания требует подготовка к сдаче образцов крови для представительниц прекрасной половины – она должна проводиться в определенный промежуток менструального цикла, который обозначает доктор. Сама процедура сдачи, как правило, назначается на утренние часы, на пустой желудок.
Общие показатели, расшифровка
Полное представление о состоянии организма и гормонального фона можно получить, сдав один из следующих видов анализов:
Гормоны щитовидной железы:
Резюме
Нельзя пренебрегать сдачей анализов на гормоны, которую рекомендует Ваш лечащий врач. Подобная диагностика позволяет выявить серьезные заболевания еще на стадии их первичного формирования, тем самым увеличив шансы на быстрое выздоровление. «ВЫМПЕЛ-МЕДЦЕНТР» – это высококачественные и точные исследования, подробные консультации и лечение различных заболеваний в Москве. Записаться на прием Вы можете на сайте или по телефону.
В основе иммуноферментного анализа лежит иммунная реакция антигена с антителом, а присоединение к антителам ферментной метки позволяет учитывать результат реакции антиген-антитело по появлению ферментативной активности или по изменению ее уровня.
