Ифа положительный пцр отрицательный что это значит
Исследования на вирус гепатита С
Антитела к вирусу гепатита С ( суммарные)
Антитела к вирусу гепатита С в сыворотке в норме отсутствуют
Суммарные антитела к вирусу гепатита С представляют собой антитела классов IgM и IgG, направленные к комплексу структурных и неструктурных белков вируса гепатита С.
Это исследование является скрининговым для выявления пациентов с ВСГ. Суммарные антитела к вирусу гепатита С можно выявить в первые 2 недели заболевания, и их присутствие свидетельствует о возможной инфицированности вирусом или перенесенной инфекции.
Однозначный ответ на основании результатов данного теста получить невозможно, так как тест определяет суммарные антитела IgM и IgG. Если это ранний период острого вирусного гепатита С, то об этом свидетельствуют антитела IgM, а если это период реконвалесценции или состояние после перенесенного ВГС, то на это указывают антитела IgG.
Антитела IgG к ВГС могут сохраняться в крови реконвалесцентов на протяжении 8-10 лет с постепенным снижением их концентрации. Возможно позднее обнаружение антител спустя год и более после инфицирования. При хроническом гепатите С суммарные антитела определяются постоянно. Поэтому для уточнения сроков инфицирования необходимо отдельно определить антитела класса IgM к ВГС.
Оценка результатов исследования
Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие суммарных антител (JgM и JgG) к ВГС в сыворотке крови. Положительный результат – выявление суммарных антител (JgM и JgG) к ВГС свидетельствует о начальной стадии острого вирусного гепатита С, остром периоде инфекции, ранней стадии реконвалесценции, перенесенном вирусном гепатите С или хроническом вирусном гепатите С.
Однако обнаружение суммарных антител к ВГС недостаточно для постановки диагноза ВГС и требует подтверждения для исключения ложноположительного результата исследования. Поэтому при получении положительного результата скринингового исследования на суммарные антитела к ВГС в лаборатории проводится подтверждающий тест. Окончательный результат определения суммарных антител к ВГС выдается совместно с результатом подтверждающего теста.
Антитела к вирусу гепатита С JgM
Антитела к вирусу гепатита С JgM в сыворотке в норме отсутствуют. Наличие антител класса JgM к ВГС в крови пациента позволяет верифицировать активную инфекцию. Антитела класса JgM могут выявляться не только при остром ВГС, но и при хроническом гепатите С.
Антитела класса JgM к ВГС появляются в крови пациента спустя 2 недели после развития клинической картины острого вирусного гепатита С или обострения хронического гепатита и обычно исчезают спустя 4-6 месяцев. Снижение их уровня может свидетельствовать об эффективности лекарственной терапии.
Оценка результатов исследования
Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие антител JgM к ВГС в сыворотке крови. Положительный результат – выявление антител JgM к ВГС свидетельствует о начальной стадии острого вирусного гепатита С, остром периоде инфекции, ранней стадии реконвалесценции или активном хроническом вирусном гепатите С.
Обнаружение вируса гепатита С методом ПЦР (качественно)
Вирус гепатита С в крови в норме отсутствует.
В отличие от серологических методов диагностики ВГС, где обнаруживают антитела к ВГС, ПЦР позволяет выявить наличие непосредственно РНК ВГС в крови как качественно, так и количественно. Определяемым фрагментом в обоих служит консервативный участок генома гепатита С.
Обнаружение только антител к ВГС подтверждает лишь факт инфицирования пациента, но не позволяет судить об активности инфекционного процесса (о репликации вируса), о прогнозе заболевания. Кроме того, антитела к вирусу ГС обнаруживают как в крови больных острым и хроническим гепатитом,так и у тех пациентов, кто болел и выздоровел, а нередко антитела в крови появляются только спустя несколько месяцев после появления клинической картины заболевания, что затрудняет диагностику. Обнаружение вируса в крови методом ПЦР – более информативный метод диагностики.
Качественное выявление ВГС методом ПЦР в крови свидетельствует о виремии, позволяет судить о размножении вируса в организме и является одним из критериев эффективности противовирусной терапии.
Аналитическая чувствительность метода ПЦР составляет не менее 50-100 вирусных частиц в 5 мкл, прошедшей выделение ДНК-пробы, специфичность – 98%. Обнаружение РНК вируса гепатита С с помощью ПЦР на ранних этапах развития вирусной инфекции (возможно уже через 1-2 недели после заражения) на фоне полного отсутствия каких-либо серологических маркеров может служить самым ранним свидетельством инфицирования.
Однако изолированное выявление РНК вируса гепатита С на фоне полного отсутствия каких-либо других серологических маркеров не может полностью исключить ложноположительный результат ПЦР. В таких случаях требуется всесторонняя оценка клинических, биохимических и морфологических исследований и повторное неоднократное подтверждение наличия инфекции ПЦР.
Согласно рекомендациям ВОЗ для подтверждения диагноза вирусного гепатита С необходимо троекратное выявление РНК вируса гепатита С в крови пациента.
Обнаружение РНК вируса гепатита С методом ПЦР используется в целях:
Обнаружение вируса гепатита С методом ПЦР (количественно)
Количественный метод определения содержания РНК вируса гепатита С в крови дает важную информацию об интенсивности развития заболевания, об эффективности лечения и о развитии резистентности к антивирусным препаратам. Аналитическая чувствительность метода составляет от 5.102 копий/мл вирусных частиц в сыворотке крови, специфичность – 98%.
Уровень виремии оценивают следующим образом: при содержании РНК ВГС от 10^2 до 10^4 копий/мл – низкий; от 10^5 до 10^7 копий/мл – средний и выше 10^8 копий /мл – высокий.
Количественное определение содержания РНК ВГС в сыворотке крови методом ПЦР имеет важное значение для прогноза эффективности лечения интерфероном-альфа. Показано, что наиболее благоприятный прогноз заболевания и наибольшую вероятность положительного ответа на противовирусную терапию имеют лица с низким уровнем виремии. При эффективном лечении уровень виремии снижается.
Метод ПЦР позволяет не только выявить РНК ВГС в крови, но и установить его генотип. Наиболее важное значение для клинической практики имеют 5 субтипов ВГС – 1а, 1b, 2а, 2b и 3а. В нашей стране наиболее часто встречается субтип 1b, далее идут 3а, 1а, 2а.
Определение генотипа (субтипа) вируса имеет важное значение для прогноза течения ВГС и подбора пациентов с хроническим ВГС к проведению лечения интерфероном-альфа и рибавирином.
При инфицировании пациента субтипом 1b хронический ВГС развивается примерно в 90% случаев, при наличии субтипов 2а и 3а – в 33-50%. У пациентов с субтипом 1b заболевание протекает в более тяжелой форме и часто заканчивается развитием цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы. При инфицировании субтипом 3а у больных более выражен стеатоз, поражение желчевыводящих путей, активность АЛТ и менее выражены фиброзные изменения в печени, чем у пациентов с субтипом 1b.
Показаниями к лечению хронического ВГС интерфероном–альфа являются:
ПЦР и ИФА при инфекции. В чем разница?
В последнее время такие методы лабораторных исследований, как ПЦР и ИФА, у многих на слуху. Это две разные методики, позволяющие различными способами определить присутствие инфекции в организме. Но что же выбрать? В чем основное отличие этих методов диагностики? Предлагаем разобраться в этих вопросах и сравнить данные методы лабораторной диагностики.
Что выявляет метод?
ПЦР (полимеразноцепная реакция) – анализ, выполненный данным методом, позволяет выявить существующие в настоящее время инфекционные агенты. Другими словами выявляется ДНК или РНК возбудителя инфекции.
ИФА (иммуноферментный анализ) – основан на выявлении не самой инфекции, а выявлении специфических антител (иммуноглобулины, Ig). Эти самые антитела вырабатываются лейкоцитами и являются своеобразным ответом на появление в организме чужеродного генетического материала. Антитела к одному возбудителю могут отличаются между собой по срокам появления: IgM – острый период заболевания; IgG – хронический процесс, или реакция на прививку.
Специфичность метода
ПЦР относится к разряду высокоспецифичных лабораторных методов исследования, то есть, если, например, выявляем хламидию, то найдем как раз только ее.
В случае проведения анализа методом ИФА, то возможен ложноположительный результат. Это происходит по той причине, что несколько микробов могут иметь схожую антигенную структуру, в результате чего к ним будут вырабатываться «похожие» антитела.
Что случит материалом для исследования?
ПЦР: венозная кровь, соскоб из урогенитального тракта, слюна, моча, эякулят (сперма), ликвор (спинномозговая жидкость) и др.
ИФА: кровь.
Можно ли выявить возбудителя на ранней стадии?
ПЦР дает возможность выявить возбудителя инфекции на момент исследования. Он чувствителен уже на самых ранних этапах инфицирования, даже когда еще нет признаков заболевания. Что касается метода ИФА, то первое время результат анализа будет отрицательным. Это связано с тем, что для выработки антител надо время. IgM появляются в крови на 5-7 сутки, igG через 2-4 недели.
Например, при проведении анализа методом ИФА на ранней стадии заболевания Вы можете столкнуться с ситуацией, когда Вы уже заражены какой-либо инфекцией, но при этом антител к ней еще нет либо их уровень находится ниже порога чувствительности тест-системы. Либо же наоборот – возбудителя уже нет в организме, а антитела еще выявляются.
Можно ли определить стадию инфекционного процесса?
Определить стадию процесса, наблюдать за динамикой заболевания можно ИФА методом. ПЦР-диагностика такой информации не предоставляет.
Результат анализа при выздоровлении. Каким он должен быть?
При выздоровлении анализ, выполненный методом ПЦР покажет «отрицательный» результат. В случае ИФА при выздоровлении IgM отрицательный или снижается, IgG может быть положительным.
Недостатки методов
ПЦР:
Дать однозначный ответ, какой метод лабораторной диагностики лучше невозможно. Какой анализ выполнить определяет врач, исходя из конкретной ситуации. Для комплексной оценки инфекции, в некоторых случаях, может потребоваться, как выявление самого возбудителя (ПЦР), так и определение антител к нему в организме пациента (ИФА).
Где сдать анализы в Харькове?
Сдать анализы в Харькове методом ПЦР и ИФА, а также выполнить ряд других лабораторных исследований Вы можете в лаборатории «ЦМЭИ». Мы предлагаем Вам получение максимально точных результатов анализов в минимальные сроки. Немаловажен также тот момент, что все это Вы можете получить по доступной цене и в комфортных условиях. Также в нашей лаборатории на Салтовке и в пунктах забора анализов по городу действуют различные выгодные пакетные предложения, с которыми Вы можете ознакомиться на нашем сайте.
У Вас остались вопросы? Звоните: (0572) 65-20-14; (063) 588-84-98; (099) 037-58-73; (068) 180-02-80. Наши администраторы обязательно помогут Вам разобраться в них. Будем рады Вам помочь!
Исследования на вирус гепатита В (ИФА и ПЦР)
Антиген «s» вируса гепатита В (HBsAg)
Поверхностный антиген гепатита В в сыворотке крови в норме отсутствует.
Обнаружение поверхностного антигена (HBsAg) гепатита В в сыворотке подтверждает острое или хроническое инфицирование вирусом гепатита В.
При остром заболевании HBsAg выявляется в сыворотке крови в последние 1-2 недели инкубационного периода и первые 2-3 недели клинического периода. Циркуляция HBsAg в крови может ограничиваться несколькими днями, поэтому следует стремиться к раннему первичному обследованию больных. Метод ИФА позволяет выявить HBsAg более чем у 90% больных. Почти у 5% больных самые чувствительные методы исследования не обнаруживают HBsAg, в таких случаях этиология вирусного гепатита В подтверждается наличием анти-HBсAg JgM или ПЦР.
Концентрация HBsAg в сыворотке крови при всех формах тяжести гепатита В в разгар заболевания имеет значительный диапазон колебаний, вместе с тем имеется определенная закономерность: в остром периоде существует обратная связь между концентрацией HBsAg в сыворотке и тяжестью болезни.
Высокая концентрация HBsAg чаще наблюдается при легких и среднетяжелых формах болезни. При тяжелых и злокачественных формах концентрация HBsAg в крови чаще низкая, причем у 20% больных с тяжелой формой и у 30% со злокачественной антиген в крови может вообще не обнаруживаться. Появление на этом фоне у больных антител к HBsAg расценивается как неблагоприятный диагностический признак; он определяется при злокачественных формах гепатита В.
При остром течении гепатита В концентрация HBsAg в крови постепенно снижается вплоть до полного исчезновения этого антигена. HBsAg исчезает у большинства больных в течение 3 месяцев от начала острой инфекции.
Снижение концентрации HBsAg более чем на 50% к концу 3-й недели острого периода, как правило, свидетельствует о близком завершении инфекционного процесса. Обычно у больных с высокой концентрацией HBsAg в разгар болезни он обнаруживается в крови в течение нескольких месяцев.
У больных с низкой концентрацией HBsAg исчезает значительно раньше (иногда через несколько дней после начала заболевания). В целом срок обнаружения HBsAg колеблется от нескольких дней до 4-5 мес. Максимальный срок обнаружения HBsAg при гладком течении острого гепатита В не превышает 6 месяцев от начала заболевания.
HBsAg может быть обнаружен у практически здоровых людей, как правило, при профилактических или случайных исследованиях. В таких случаях исследуют другие маркеры вирусного гепатита В – анти HBсAg JgM, анти- HBсAg JgG, анти HBеAg и изучают функцию печени.
Исследование крови на наличие HBsAg применяется в следующих целях:
для диагностики острого гепатита В:
для диагностики хронического вирусного гепатита В;
для скрининга и выявления больных в группах риска:
Оценка результатов исследования
Результаты исследования выражаются качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие HBsAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление HBsAg свидетельствует об инкубационном или остром периоде острого вирусного гепатита В, а также при хроническом вирусном гепатите В.
Антитела к ядерному антигену вируса гепатита В JgG (анти- HBcAg JgG )
В норме анти-HBcAg JgG в сыворотке отсутствует.
У больных анти-HBcAg JgG появляются в острый период вирусного гепатита В и сохраняются на протяжении всей жизни. Анти-HBcAg JgG – ведущий маркер перенесенного ВГВ.
Исследование крови на наличие анти-HBcAg JgG применяются для диагностики:
Оценка результатов исследования
Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие анти-HBcAg JgG в сыворотке крови. Положительный результат – выявление анти-HBcAg JgG свидетельствует об острой инфекции, реконвалесценции или ранее перенесенном вирусном гепатите В.
Антиген «е» вируса гепатита В (HBeAg)
В норме HBeAg в сыворотке крови отсутствует.
HBeAg можно обнаружить в сыворотке крови большинства больных острым вирусным гепатитом В. Он обычно исчезает в крови раньше HBs-антигена. Высокий уровень HBeAg в первые недели заболевания или обнаружение его на протяжении более 8 недель дает основание заподозрить хроническую инфекцию.
Наличие HBeAg в крови свидетельствует о высокой ее инфекциозности, т.е. присутствии в организме обследуемого активной инфекции гепатита В, и обнаруживается только в случае присутствия в крови HBs-антигена. У больных хроническим активным гепатитом противовирусные препараты применяются только при обнаружении в крови HBeAg. HBeAg – антиген – маркер острой фазы и репликации вируса гепатита В.
Исследование крови на наличие HBe-антигена применяется для диагностики:
Оценка результатов исследования
Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие HBeAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление HBeAg свидетельствует об инкубационном или остром периоде острого вирусного гепатита В или продолжающейся репликации вируса и инфекциозности больного.
Антитела к антигену «е» вируса гепатита В (anti-HBeAg)
Анти-HBeAg в сыворотке в норме отсутствует. Появление анти-НВeAg антител указывает обычно на интенсивное выведение из организма вируса гепатита В и незначительное инфицирование больного.
Эти антитела появляются в острый период и сохраняются до 5 лет после перенесенной инфекции. При хроническом персистирующем гепатите анти-НВeAg обнаруживаются в крови больного вместе с НВsAg. Сероконверсия, т.е. переход HBeAg в анти-НВeAg, при хроническом активном гепатите, чаще прогностически благоприятна, но такая же сероконверсия при выраженной цирротической трансформации печени прогноза не улучшает.
Исследование крови на наличие анти-НВeAg применяются в следующих случаях при диагностике вирусного гепатита В:
Оценка результатов исследования
Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие антител к HBeAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление антител к HBeAg, которые могут свидетельствовать о начальной стадии острого вирусного гепатита В, остром периоде инфекции, ранней стадии реконвалесценции, реконвалесценции, перенесенном недавно вирусном гепатите В или персистирующем вирусном гепатите В.
Критериями наличия хронического гепатита В являются:
Обнаружение вируса гепатита В методом ПЦР (качественно)
Вирус гепатита В в крови в норме отсутствует.
Качественное определение вируса гепатита В методом ПЦР в крови позволяет подтвердить наличие вируса в организме больного и тем самым устанавливает этиологию заболевания.
Данное исследование дает полезную информацию для диагностики острого вирусного гепатита В в инкубационном и раннем периоде развития заболевания, когда основные серологические маркеры в крови у пациента могут отсутствовать. Вирусную ДНК в сыворотке крови обнаруживают у 50% больных при отсутствии HBeAg. Аналитическая чувствительность метода ПЦР составляет не менее 80 вирусных частиц в 5 мкл, прошедшей выявление ДНК пробы, специфичность – 98%.
Этот метод имеет важное значение для диагностики и мониторинга течения хронического ВГВ. Примерно 5-10% случаев цирроза и других хронических заболеваний печени обусловлены хроническим носительством вируса гепатита В. Маркерами активности таких заболеваний является наличие HBeAg и ДНК вируса гепатита В в крови.
Метод ПЦР позволяет определять в крови ДНК вируса гепатита В как качественно, так и количественно. Определяемым фрагментом в обоих случаях служит уникальная последовательность ДНК гена структурного белка вируса гепатита В.
Обнаружение ДНК вируса гепатита В в биоматериале с помощью ПЦР необходимо для:
Исчезновение ДНК вируса гепатита В из крови – признак эффективности терапии
Обнаружение вируса гепатита В методом ПЦР (количественно)
Вирусную ДНК в сыворотке крови обнаруживают у 50% больных при отсутствии HBeAg. Материалом для выявления ДНК вируса гепатита В могут служить сыворотка крови, лимфоциты, гепатобиоптаты.
Существует зависимость между исходом острого вирусного гепатита В и концентрацией ДНК ВГВ в крови больного. При низком уровне виремии процесс хронизации инфекции близок к нулю, при средней – хронизация процесса наблюдается у 25-30% больных, а при высоком уровне виремии острый вирусный гепатит В чаще всего переходит в хронический.
Показаниями для лечения хронического ВГВ интерфероном-альфа следует считать наличие маркеров активной репликации вируса (выявление HBsAg, HBeAg и ДНК ВГВ в сыворотке крови в течение предшествующих 6 месяцев.).
Критериями оценки эффективности лечения служат исчезновение HBeAg и ДНК ВГВ в крови, что обычно сопровождается нормализацией уровня трансаминаз и долговременной ремиссией заболевания, ДНК ВГВ исчезает из крови к 5-му месяцу лечения у 60%, к 9-му месяцу – у 80% больных. Снижение уровня виремии на 85% и более к третьему дню от начала лечения по сравнению с исходным служит быстрым и достаточно точным критерием для прогнозирования эффективности терапии.
ИФА и ПЦР: просто о сложных лабораторных методах диагностики инфекций
Опубликовано 29 ноября 2014 пользователем a.ultanbay
В лабораторной диагностике существует множество методов выявления необходимого элемента в биоматериале. Для диагностики инфекционных заболеваний чаще всего используют два принципиально разных метода: ИФА и ПЦР. Мы предлагаем Вам ознакомиться с данными методами, чтоб понять плюсы и минусы каждого из них.
ПЦР – один из самых наукоемких методов. Он обнаруживает ДНК микроорганизма. Генетический материал индивидуален для любого микроба, а это значит, что метод обладает самой высокой специфичностью и не может «обознаться». Принцип ПЦР заключается в том, что в пробирке происходит многократное удвоение искомого генетического кода. В случае присутствия даже незначительного количества этого кода, произойдет увеличение его количества, и анализатор сможет «уловить» его наличие. Таким образом, ПЦР – «золотой стандарт» выявления инфекционных агентов. Однако, у этого метода есть и свои минусы. Во-первых, в отличие от ИФА, ПЦР может сказать о наличии возбудителя только в месте взятия биоматериала, которое ограничено мазком (например, с уретры или из носа). Во-вторых, за счет своей высокой чувствительности, ПЦР может обнаружить даже мертвые частицы микробов, что наблюдается сразу после лечения. В таком случае, результат будет ложноположительный.
Резюмируя вышесказанное, приведем таблицу сравнения этих двух методов друг с другом:
ПЦР или ИФА. Когда необходимы оба исследования, а когда можно обойтись одним из них?
Давайте поговорим об одном из важнейших вопросов в диагностике инфекционных заболеваний у животных. На данную тему многое сказано и написано, но у владельцев и заводчиков до сих пор возникают вопросы и сложности. В настоящее время ИФА (иммуноферментный анализ) и ПЦР (полимеразная цепная реакция) являются наиболее достоверными методами диагностики инфекционных заболеваний у животных и человека. Основанные на последних достижениях молекулярной биологии, данные способы исследования быстро вошли в ветеринарную практику и, тем самым, значительно подняли общий уровень диагностики в целом. Каждый из этих методов позволяет оценить ситуацию с определенной стороны, в зависимости от цели, которая ставится при исследовании.
ПЦР – один из самых точных и чувствительных методов в лабораторной диагностике. Он обнаруживает макромолекулы ДНК или РНК возбудителей даже в случае присутствия незначительного их количества в пробе. Генетический материал бактериальной или вирусной инфекции индивидуален, а это значит, что метод обладает самой высокой специфичностью. Принцип ПЦР заключается в том, что происходит многократное избирательное копирование искомого участка генетического кода предполагаемой инфекции. Таким образом, ПЦР – «золотой стандарт» выявления инфекционных агентов. Важным достоинством является то, что вирусные инфекции можно обнаруживать сразу после заражения, за недели или месяцы до того, как проявятся первые симптомы. Метод ПЦР незаменим для выявления латентных (скрытых) и хронических инфекций.
ИФА – это лабораторный иммунологический метод качественного определения и количественного измерения антител к различным возбудителям инфекций, а именно – антигенам. Также антигенами могут выступать собственные клетки организма, образующиеся в результате аутоиммунных или онкологических заболеваний. Метод ИФА обладает высокой чувствительностью и специфичностью, которая в настоящее время составляет более 90% и позволяет обнаружить реакцию организма животного на инфекционный процесс.
Достоинства ИФА — возможность диагностики через 1-3 недели после контакта с возбудителем инфекции и возможность прослеживать динамику развития заболевания.
ИФА, относясь к непрямым методам диагностики, основан на выявлении не самой инфекции, а продуктов ее жизнедеятельности в организме животного — белков–маркеров – иммуноглобулинов, которые вырабатывает иммунная система в ответ на инфекцию. Для каждого возбудителя заболевания продуцируются сугубо индивидуальные антитела, которые впоследствии и будут идентифицированы системой ИФА. Время обнаружения антител зависит как от самой инфекции, так и от особенностей иммунной системы конкретного животного.
Метод ИФА ищет «следы» реакции на вторжение инфекции, а не саму инфекцию!
Наличие иммуноглобулинов не гарантирует присутствия в организме искомого инфекционного агента.
Отсутствие антител не говорит о том, что инфекции нет.
Если результат анализа методом ИФА положительный, то это значит, что нужно искать инфекцию более специфическими методами – ПЦР, бактериологические посевы.
Определить, какой лучше сдать анализ для диагностики, в каждой конкретной ситуации может только врач, назначающий обследование. Для комплексной оценки инфекции, в некоторых случаях, может потребоваться как выявление самого возбудителя (ПЦР), так и определение антител к нему в организме животного (ИФА), с последующим контролем после проведенного лечения.
Случается, что результаты ПЦР и ИФА-диагностики могут не совпадать и в этом случае необходимо грамотно интерпретировать полученные результаты, основываясь на патогенезе предполагаемого инфекционного заболевания.
Амплификатор BIO RAD T-100
Во-первых, стоит помнить, что ПЦР может сказать о наличии возбудителя только в месте взятия биоматериала, которое ограничено (например, смывом из глаза или из носа). Для ИФА–диагностики разницы в месте нет, поскольку ИФА «реагирует» на антитела, которые вырабатываются при инфекционном процессе любой локализации. Как результат — ПЦР–диагностика дает отрицательный, а ИФА — положительный результат. Например, микроорганизмы семейства Chlamydiacеae могут локализироваться в организме животных в различных местах. И анализ ПЦР, взятый в неправильной области, ДНК хламидии не обнаружит. Но ИФА–метод все равно выявит выработку антител, сопровождающую инфекционный процесс. В таком случае необходимо сдавать оба анализа для подтверждения инфекционной природы заболевания.
Единственным ограничением продукции антител в организме при наличии инфекции может быть иммунодефицитное состояние у животного, например, при лейкозе или иммунодефиците у кошек.
Во-вторых, если результат ИФА пришел положительным, то не стоит сразу приступать к лечению инфекционного заболевания, необходимо сопоставить данный результат с клинической картиной и, возможно, результатами других методов обследования. Известно, что после пройденного курса лечения антитела могут оставаться в организме очень долго, даже после того, как инфекция покинула тело, то есть остается так называемый «серологический шрам» – след от уже перенесенной инфекции. Причем, в связи с индивидуальными особенностями иммунной системы, положительный результат ИФА–диагностики, вызванный повышенным содержанием антител, может сохраняться несколько месяцев и даже лет после полного выздоровления животного. Но возможно и обратное, например, после лечения хламидиоза, микоплазмоза – заболеваний, поражающих органы дыхания, желудочно-кишечный тракт, репродуктивные органы, уровень антител в крови значительно снижается, так как иммунитет против этих заболеваний у животных не развивается.
Следует помнить, что антитела в организме могут образовываться в ответ на недавнюю вакцинацию и высокий их уровень, очевидно, может быть связан с искусственным введением антигена в организм животного.
Немаловажно то, что материал, взятый сразу после лечения инфекции, может содержать мертвые частицы микроорганизмов, которые метод ПЦР идентифицирует за счет своей высокой чувствительности. В таком случае, результат будет ложноположительный.
Хронические инфекционные заболевания могут стать причиной разницы в результатах ИФА и ПЦР. При этом зачастую ПЦР дает положительный, а ИФА — отрицательный результат. Уставшая от хронического инфекционного процесса иммунная система может «не показать» повышенный уровень антител к инфекции. Подобное может наблюдаться и в том случае, если инфекция «свежая», даже при наличии определенных симптомов заболевания уровень антител в крови не превысит норму, поскольку они еще не начали вырабатываться. При данных ситуациях необходимы не только оба исследования, но и клинический анализ крови, и дополнительные методы оценки клеточного иммунитета.
Получение положительного результата ПЦР может быть вызвано использованием тест-систем, которые выявляют все виды бактерий, в том числе и те, которые в определенном количестве в норме содержатся в организме животного. Например, тест-система для ПЦР–диагностики настроена на выявление всех видов микроорганизмов семейства Chlamydiaceae: Chlamydophila Pneumonia, C. Psitaci, C. Abortus, C. felis. Однако хламидиями заражено примерно 18-38% собак, а клинически выраженный хламидиоз встречается в спорадических случаях. Носительство хламидий выявляется также у 65-70 % кошек. Кошки – латентные носители возбудителя (содержится в слюне, моче, экскрементах, на лапках внешне здоровых животных). Поэтому положительный результат ПЦР–анализа в таком случае должен быть правильно интерпретирован врачом, согласован с материалом исследования, картиной заболевания и, обязательно, ИФА – диагностикой крови пациента.
Другой пример: у кошек встречается несколько видов микроорганизмов рода Mycoplasma, чаще всего М. felis и М. gatae. Это частые обитатели слизистых оболочек, М. felis и М. gatae обнаруживаются у 70-80% здоровых кошек. Предполагается, что М. felis может быть патогенной, а М. gatae – естественный коммерсал конъюнктивы и верхних дыхательных путей кошек (то есть безвредная микрофлора). При проведении ПЦР–анализа результат может быть положительным, а ИФА – отрицательным, вследствие отсутствия специфической реакции организма на присутствующую условно-патогенную микрофлору, следовательно, возможное заболевание, например, конъюнктивы глаз было вызвано не данным микроорганизмом.
Ветеринарному врачу необходимо понимать патогенез того или иного заболевания, так коронавирусная инфекция кошек, вызываемая семейством Coronaviridae, а именно штаммами FIPV, подавляет иммунитет, и антитела к возбудителю могут и не обнаруживаться. Положительный результат ИФА говорит о наличии в организме коронавируса, но не дает информации о том, где этот вирус находится – в кишечнике или в тканях.
В связи с этим важным является непосредственное выявление возбудителя заболевания – ПЦР. Однако использование метода ПЦР не может позволить провести дифференциацию условно-патогенных и патогенных штаммов в организме и отличить состояние носительства от заболевания, вызывающего тяжелый перитонит, как правило, с летальным исходом. Положительный ответ ПЦР при выделении вируса с фекалиями говорит о том, что животное в данный момент представляет опасность для окружающих кошек. Согласно ряду исследований, некоторые кошки, в организме которых еще находится вирус, перестают распространять его в течение нескольких недель. Но есть вероятность длительного вирусоносительства, с повторяющимися периодами выделения вируса во внешнюю среду со слюной и фекальными массами.
Подводя итоги, можно сказать, что и ИФА, и ПЦР–анализы сами по себе не являются панацеей в диагностике инфекций. Нельзя одной ПЦР или ИФА–диагностикой заменить все существующие методы исследования, ими можно лишь дополнить их, позволив всем методам достигнуть реальных, точных, достоверных результатов.
Заведущая лабораторий – Тосторожева А.Б. ВЛДОЦ СТАТУС. Март 2017 г.