Иммуногистохимия эндометрия что это
ИГХ-исследование рецептивности эндометрия: ER, PR в Жандама
Иммуногистохимическое (ИГХ) исследование рецепторов к эстрогенам и прогестерону в эндометрии дает возможность оценить способность эмбриона прикрепляться к слизистой оболочке матки. Применяется в комплексной диагностике причин бесплодия, невынашивания беременности, перед назначением гормональной терапии в программах ЭКО или при неудачных попытках ЭКО. Оценка гормонально-рецепторного статуса при гиперпластических процессах эндометрия и раке тела матки позволяет прогнозировать эффективность гормонального лечения. ИГХ исследование рецептивности эндометрия выполняется только в комплексе с гистологическим исследованием.
Приём и исследование биоматериала
Когда нужно сдавать анализ ИГХ-исследование рецептивности эндометрия: ER, PR?
Подробное описание исследования
Рецептивность эндометрия определяется комплексом его структурно-функциональных характеристик, одним из важных факторов которого является состояние внутриклеточных рецепторов к половым стероидам. Количество рецепторов в эндометрии зависит от уровня половых гормонов в крови. Эстрадиол увеличивает количество рецепторов к эстрогенам, прогестерону и андрогенам. Прогестерон, наоборот, снижает экспрессию рецепторов к эстрогенам и прогестерону. Рецепторы половых стероидов участвуют в регуляции переноса генетической информации с ДНК на РНК специфических генов.
Одной из серьезных причин репродуктивных потерь является нарушение рецептивности эндометрия, что приводит к невозможности имплантации. Имплантация — внедрение эмбриона в слизистую оболочку матки (эндометрий) — сложный многоэтапный процесс возможный только в период «окна имплантации». Окно имплантации — это временной промежуток, когда эндометрий находится в состоянии максимальной зрелости (наибольшей рецептивности), то есть он способен обеспечить благополучное прикрепление эмбриона и дальнейшее прогрессирование беременности. Чаще всего это период наступает на 5–10 день после овуляции (на 20–24 день 28 дневного менструального цикла).
Рецепторов к эстрогенам существует 2 типа — α- (ЭРα) и β — (ЭРβ). Максимальное количество α-рецепторов обнаруживается в эпителиальных клетках слизистой оболочки матки в периовуляторный период. ЭРβ в периовуляторном периоде экспрессируют в эпителиальных клетках эндометрия, а в середине секреторной фазы маточного цикла — в клетках стромы и эндотелиоцитах.
Прогестероновые рецепторы находятся в стромальных клетках эндометрия и представлены двумя изоформами — A и B (ПР-A и ПР-B) в равных соотношениях. В лютеиновую фазу прогестерон увеличивает концентрацию А-изоформы рецепторов. До середины секреторной фазы содержание прогестероновых рецепторов поддерживается на максимальном уровне. Прогестерон влияет на дифференцировку клеток слизистой оболочки матки и обеспечивает подготовку эндометрия к имплантации бластоцисты. В преимплантационный период также увеличивается количество эстрогеновых рецепторов.
У женщин с бесплодием в эпителиальных клетках эндометрия отмечается уменьшение рецепторов прогестерона. Снижение ЭРα запускает активизацию генов, отвечающих за рецептивность эндометрия. И, наоборот, гиперэкспрессия ЭРα в секреторную фазу цикла способствует снижению уровня биологических маркеров имплантации.
Снижению рецептивности эндометрия могут способствовать хронический эндометрит, гиперпластические процессы эндометрия, аденомиоз, миома матки, пороки развития матки, соматические и аутоиммунные заболевания, различные тромбофилии и др.
ИГХ исследование позволяет определить рецепторный статус эндометрия. Специально подготовленные биоптаты эндометрия обрабатываются моноклинальными мечеными антителами, которые связываются с соответствующими рецепторами, затем биоматериал изучается под микроскопом. Результат оценивается по степени окраски клеток эндометрия — чем интенсивнее окраска, тем выше концентрация рецепторов. С помощью ИГХ исследования определяется локализация рецепторов в эндометрии (в железистых или стромальных клетках). Для успешной имплантации критически важно знать количество рецепторов в клетках стромы эндометрия.
От степени дифференцировки опухоли эндометрия зависит экспрессия рецепторов к стероидным гормонам. Чем ниже степень дифференцировки, тем меньше рецепторов в ней обнаруживается и, соответственно, тем менее эффективным будет гормональное лечение и хуже прогноз заболевания.
ИГХ-исследование рецептивности эндометрия: ER, PR в Москве
Иммуногистохимическое (ИГХ) исследование рецепторов к эстрогенам и прогестерону в эндометрии дает возможность оценить способность эмбриона прикрепляться к слизистой оболочке матки. Применяется в комплексной диагностике причин бесплодия, невынашивания беременности, перед назначением гормональной терапии в программах ЭКО или при неудачных попытках ЭКО. Оценка гормонально-рецепторного статуса при гиперпластических процессах эндометрия и раке тела матки позволяет прогнозировать эффективность гормонального лечения. ИГХ исследование рецептивности эндометрия выполняется только в комплексе с гистологическим исследованием.
Приём и исследование биоматериала
Когда нужно сдавать анализ ИГХ-исследование рецептивности эндометрия: ER, PR?
Подробное описание исследования
Рецептивность эндометрия определяется комплексом его структурно-функциональных характеристик, одним из важных факторов которого является состояние внутриклеточных рецепторов к половым стероидам. Количество рецепторов в эндометрии зависит от уровня половых гормонов в крови. Эстрадиол увеличивает количество рецепторов к эстрогенам, прогестерону и андрогенам. Прогестерон, наоборот, снижает экспрессию рецепторов к эстрогенам и прогестерону. Рецепторы половых стероидов участвуют в регуляции переноса генетической информации с ДНК на РНК специфических генов.
Одной из серьезных причин репродуктивных потерь является нарушение рецептивности эндометрия, что приводит к невозможности имплантации. Имплантация — внедрение эмбриона в слизистую оболочку матки (эндометрий) — сложный многоэтапный процесс возможный только в период «окна имплантации». Окно имплантации — это временной промежуток, когда эндометрий находится в состоянии максимальной зрелости (наибольшей рецептивности), то есть он способен обеспечить благополучное прикрепление эмбриона и дальнейшее прогрессирование беременности. Чаще всего это период наступает на 5–10 день после овуляции (на 20–24 день 28 дневного менструального цикла).
Рецепторов к эстрогенам существует 2 типа — α- (ЭРα) и β — (ЭРβ). Максимальное количество α-рецепторов обнаруживается в эпителиальных клетках слизистой оболочки матки в периовуляторный период. ЭРβ в периовуляторном периоде экспрессируют в эпителиальных клетках эндометрия, а в середине секреторной фазы маточного цикла — в клетках стромы и эндотелиоцитах.
Прогестероновые рецепторы находятся в стромальных клетках эндометрия и представлены двумя изоформами — A и B (ПР-A и ПР-B) в равных соотношениях. В лютеиновую фазу прогестерон увеличивает концентрацию А-изоформы рецепторов. До середины секреторной фазы содержание прогестероновых рецепторов поддерживается на максимальном уровне. Прогестерон влияет на дифференцировку клеток слизистой оболочки матки и обеспечивает подготовку эндометрия к имплантации бластоцисты. В преимплантационный период также увеличивается количество эстрогеновых рецепторов.
У женщин с бесплодием в эпителиальных клетках эндометрия отмечается уменьшение рецепторов прогестерона. Снижение ЭРα запускает активизацию генов, отвечающих за рецептивность эндометрия. И, наоборот, гиперэкспрессия ЭРα в секреторную фазу цикла способствует снижению уровня биологических маркеров имплантации.
Снижению рецептивности эндометрия могут способствовать хронический эндометрит, гиперпластические процессы эндометрия, аденомиоз, миома матки, пороки развития матки, соматические и аутоиммунные заболевания, различные тромбофилии и др.
ИГХ исследование позволяет определить рецепторный статус эндометрия. Специально подготовленные биоптаты эндометрия обрабатываются моноклинальными мечеными антителами, которые связываются с соответствующими рецепторами, затем биоматериал изучается под микроскопом. Результат оценивается по степени окраски клеток эндометрия — чем интенсивнее окраска, тем выше концентрация рецепторов. С помощью ИГХ исследования определяется локализация рецепторов в эндометрии (в железистых или стромальных клетках). Для успешной имплантации критически важно знать количество рецепторов в клетках стромы эндометрия.
От степени дифференцировки опухоли эндометрия зависит экспрессия рецепторов к стероидным гормонам. Чем ниже степень дифференцировки, тем меньше рецепторов в ней обнаруживается и, соответственно, тем менее эффективным будет гормональное лечение и хуже прогноз заболевания.
Иммуногистохимия эндометрия что это
Гистологическое и иммуногистохимическое исследование рецептивности эндометрия «окна имплантации» (количество ER, PGR, СD56, CD138, LIF); гистология и ИГХ рецепторного статуса эндометрия, расширенное (фаза секреции (ER/PR/CD138/CD56/LIF)).
Histologic evaluation and immunohistochemical test of endometrial receptivity (advanced).
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Образец ткани (биоптат) из полости матки.
Общая информация об исследовании
Эндометрий – это внутренняя часть слизистой оболочки матки, обращенная к ее полости. Его основная функция состоит в создании оптимальных условий для имплантации эмбриона в матку и успешного наступления беременности. Ведущее значение в процессе имплантации имеет рецептивность эндометрия – способность воспринимать оплодотворенную яйцеклетку и обеспечивать ее прикрепление и внедрение в полость матки. На рецептивность оказывают влияние изменения эндометрия на тканевом, клеточном и молекулярном уровне.
Период, когда эндометрий максимально восприимчив к имплантации оплодотворенной яйцеклетки, называется имплантационным окном. Наиболее часто имплантационное окно наступает с 5-го по 10-й дни после овуляции (соответственно, 20-24-й дни 28-дневного менструального цикла), а его продолжительность составляет не более 48 часов. При овариальной стимуляции в рамках процедур вспомогательных репродуктивных технологий данные временные интервалы сдвигаются. В период имплантационного окна взаимодействие эндометрия и эмбриона приводит к имплантации оплодотворенной яйцеклетки и наступлению беременности, в любое другое время эндометрий является нерецептивным и успешная имплантация эмбриона в него невозможна.
Наступление окна имплантации сопровождается изменениями наружного слоя эндометрия – покровного эпителия, в котором образуются мельчайшие выпячивания (пиноподии). Их образование соответствует периоду максимальной рецептивной активности эндометрия. Именно на поверхности пиноподий происходят начальные этапы присоединения оплодотворенной яйцеклетки к эндометрию. Для данного процесса исключительное значение имеет вырабатываемый пиноподиями цитокин – LIF (Leukemia inhibitory factor, ингибирующий лейкемию фактор), продукция которого достигает пика именно в период окна имплантации, что позволяет отнести его к молекулярным маркерам рецептивности эндометрия. Эмбрион представляет на своих клетках рецепторы к LIF и присоединяется к участкам эндометрия с большим количеством пиноподий.
Нарушение рецептивности эндометрия в период окна имплантации, а также его взаимодействия с оплодотворенной яйцеклеткой являются причиной бесплодия, невынашивания беременности и неудач вспомогательных репродуктивных технологий, в том числе экстракорпорального оплодотворения, при котором, по некоторым данным, около 65% неудачных попыток связаны именно с патологией эндометрия. Значительная роль в генезе эндометриальной дисфункции, сопровождающейся нарушением рецептивности эндометрия, принадлежит хроническому эндометриту. Длительное течение воспалительного процесса в слизистой оболочке тела матки приводит к структурным нарушениям эндометрия и снижению или практически полному отсутствию на его клетках эстрогеновых и прогестероновых рецепторов.
Однако при адекватном лечении возможно восстановление физиологического состояния эндометрия и успешное наступление беременности. В связи с этим диагностика рецептивного статуса эндометрия и причин его нарушения занимает важное место в определении причин бесплодия и неудачных попыток вспомогательных репродуктивных технологий.
На первом этапе исследования биоптата в обязательном порядке проводится гистологическое исследование, которое позволяет оценить состояние клеточных структур, желез и сосудов эндометрия, а также наличие признаков воспалительных изменений. Морфологическим субстратом хронического эндометрита являются лимфоидные инфильтраты в слое эндометрия, состоящие из лимфоцитов и плазматических клеток. В последнее время в связи с широким применением противомикробной и противовоспалительной терапии классические гистологические признаки хронического эндометрита выявляются все реже, что требует проведения дополнительных методов диагностики. В состав данного комплекса входит иммуногистохимическое исследование, которое включает в себя определение на клетках эндометрия следующих маркеров:
ER и PR – рецепторы к эстрогену и прогестерону;
LIF – ингибирующий лейкемию фактор;
CD56 – маркер лимфоцитов, относящихся к классу натуральных киллеров;
Биологический материал для данного исследования целесообразно получать посредством пайпель-биопсии эндометрия или соскоба из полости матки. После взятия биоптата его помещают в ёмкость с фиксирующим раствором на 24-48 часов. По окончании фиксации биоптат декальцинируют, обезвоживают и пропитывают парафином – получаются готовые парафиновые блоки. Для гистологического исследования из парафинового блока с помощью специального микроножа нарезают тончайшие срезы, которые затем прикрепляют к предметным стеклам и красят рутинными красителями. Затем для проведения иммуногистохимического исследования срезы окрашивают растворами антител, меченных флюоресцирующими метками, специфичными к одному из исследуемых маркеров. Если в клетках эндометрия присутствует искомый рецептор, антитела связываются с ним и при просмотре стекла под специальным микроскопом можно увидеть флюоресценцию, что будет свидетельствовать о положительном результате теста. Количество применяемых растворов с антителами соответствует количеству маркеров, которые исследуются в образце. Степень флюоресценции и процент клеток, в которых она есть, лежит в основе интерпретации результатов иммуногистохимического анализа.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Что означают результаты?
Результат гистологического исследования включает в себя макроскопическое описание биоптата (размеры, цвет), описание желез, стромального и сосудистого компонента эндометрия с наличием или отсутствием признаков воспалительных изменений. В заключении указывается соответствие строения эндометрия фазе менструального цикла.
Результаты иммуногистохимического определения экспрессии ER и PR оцениваются по системе Histochemical Score. В данной системе учитывается не только процент окрашенных антителами клеток, но и интенсивность окраски. Максимальное значение по этой шкале соответствует 300 баллам. Полученное количество баллов, характеризующих экспрессию ER и PR, расценивают следующим образом:
Экспрессия LIF оценивается полуколичественным методом в баллах по общепринятой методике:
Степень выраженности хронического эндометрита по маркерам иммунокомпетентных клеток CD138 и CD56 оценивают по количеству позитивных клеток в поле зрения:
Результат исследования обязательно содержит интерпретацию полученных данных врачом-патоморфологом. Клиническая интерпретация результатов исследования должна проводиться исключительно врачом соответствующей специальности.
Что может влиять на результат?
Качество предоставленных парафиновых блоков, опыт и квалификация врача-патоморфолога, так как иммуногистохимический метод не в полной мере стандартизирован и оценка его результатов в некоторой степени субъективна.
Планирование беременности – здоровье партнеров (для женщин)
Обследование женщин при планировании ЭКО (2-5 день цикла)
Гормональные анализы при планировании ЭКО (20-23 день цикла)
Обследование мужчин при планировании ЭКО
Панель «Ответ на стимуляцию яичников при ЭКО» – 4 маркера
Кто назначает исследование?
Endometrial receptivity. Aboubakr M. Elnashar, Gamal I. Aboul-Enein. Middle East Fertility Society Journal, Vol. 9, No. 1, 2004. Pages 10-24.
Эндометриальная дисфункция: алгоритм гистологического и иммуногистохимического исследования. Г. Х. Толибова, Т. Г. Траль, М. А. Клещёв, И. М. Кветной, Э. К. Айламазян. Журнал акушерства и женских болезней. Выпуск 4, том LXIV, 2015. С. 69-77.
Рецептивность эндометрия: молекулярные механизмы регуляции имплантации. Ю. С. Крылова, И. М. Кветной, Э. К. Айламазян. Журнал акушерства и женских болезней. Выпуск 2, том LXII, 2013. С. 63-74.
Проблемы коммуникации эмбриона и эндометрия: маркеры нарушений и механизмы влияния. О. А. Мелкозерова, Н. В. Башмакова, А. В. Есарева. Российский вестник акушера-гинеколога, №5, 2016. С. 29-36.
Приказ Минздрава РФ от 30.08.2012 N107н «О порядке использования вспомогательных репродуктивных технологий, противопоказаниях и ограничениях к их применению».
ИГХ-исследование рецептивности эндометрия: ER, PR в Темрюк
Иммуногистохимическое (ИГХ) исследование рецепторов к эстрогенам и прогестерону в эндометрии дает возможность оценить способность эмбриона прикрепляться к слизистой оболочке матки. Применяется в комплексной диагностике причин бесплодия, невынашивания беременности, перед назначением гормональной терапии в программах ЭКО или при неудачных попытках ЭКО. Оценка гормонально-рецепторного статуса при гиперпластических процессах эндометрия и раке тела матки позволяет прогнозировать эффективность гормонального лечения. ИГХ исследование рецептивности эндометрия выполняется только в комплексе с гистологическим исследованием.
Приём и исследование биоматериала
Когда нужно сдавать анализ ИГХ-исследование рецептивности эндометрия: ER, PR?
Подробное описание исследования
Рецептивность эндометрия определяется комплексом его структурно-функциональных характеристик, одним из важных факторов которого является состояние внутриклеточных рецепторов к половым стероидам. Количество рецепторов в эндометрии зависит от уровня половых гормонов в крови. Эстрадиол увеличивает количество рецепторов к эстрогенам, прогестерону и андрогенам. Прогестерон, наоборот, снижает экспрессию рецепторов к эстрогенам и прогестерону. Рецепторы половых стероидов участвуют в регуляции переноса генетической информации с ДНК на РНК специфических генов.
Одной из серьезных причин репродуктивных потерь является нарушение рецептивности эндометрия, что приводит к невозможности имплантации. Имплантация — внедрение эмбриона в слизистую оболочку матки (эндометрий) — сложный многоэтапный процесс возможный только в период «окна имплантации». Окно имплантации — это временной промежуток, когда эндометрий находится в состоянии максимальной зрелости (наибольшей рецептивности), то есть он способен обеспечить благополучное прикрепление эмбриона и дальнейшее прогрессирование беременности. Чаще всего это период наступает на 5–10 день после овуляции (на 20–24 день 28 дневного менструального цикла).
Рецепторов к эстрогенам существует 2 типа — α- (ЭРα) и β — (ЭРβ). Максимальное количество α-рецепторов обнаруживается в эпителиальных клетках слизистой оболочки матки в периовуляторный период. ЭРβ в периовуляторном периоде экспрессируют в эпителиальных клетках эндометрия, а в середине секреторной фазы маточного цикла — в клетках стромы и эндотелиоцитах.
Прогестероновые рецепторы находятся в стромальных клетках эндометрия и представлены двумя изоформами — A и B (ПР-A и ПР-B) в равных соотношениях. В лютеиновую фазу прогестерон увеличивает концентрацию А-изоформы рецепторов. До середины секреторной фазы содержание прогестероновых рецепторов поддерживается на максимальном уровне. Прогестерон влияет на дифференцировку клеток слизистой оболочки матки и обеспечивает подготовку эндометрия к имплантации бластоцисты. В преимплантационный период также увеличивается количество эстрогеновых рецепторов.
У женщин с бесплодием в эпителиальных клетках эндометрия отмечается уменьшение рецепторов прогестерона. Снижение ЭРα запускает активизацию генов, отвечающих за рецептивность эндометрия. И, наоборот, гиперэкспрессия ЭРα в секреторную фазу цикла способствует снижению уровня биологических маркеров имплантации.
Снижению рецептивности эндометрия могут способствовать хронический эндометрит, гиперпластические процессы эндометрия, аденомиоз, миома матки, пороки развития матки, соматические и аутоиммунные заболевания, различные тромбофилии и др.
ИГХ исследование позволяет определить рецепторный статус эндометрия. Специально подготовленные биоптаты эндометрия обрабатываются моноклинальными мечеными антителами, которые связываются с соответствующими рецепторами, затем биоматериал изучается под микроскопом. Результат оценивается по степени окраски клеток эндометрия — чем интенсивнее окраска, тем выше концентрация рецепторов. С помощью ИГХ исследования определяется локализация рецепторов в эндометрии (в железистых или стромальных клетках). Для успешной имплантации критически важно знать количество рецепторов в клетках стромы эндометрия.
От степени дифференцировки опухоли эндометрия зависит экспрессия рецепторов к стероидным гормонам. Чем ниже степень дифференцировки, тем меньше рецепторов в ней обнаруживается и, соответственно, тем менее эффективным будет гормональное лечение и хуже прогноз заболевания.
Иммуногистохимия
Иммуногистохимия — способ исследования биологического материала после окрашивания с помощью специфических антител, которые связываются с определяемым веществом. Этот метод был разработан еще в первой половине ХХ века и к настоящему времени получил колоссальное развитие.
Выделяют два способа проведения реакции:
Антитела, используемые в иммуногистохимии, могут быть маркированы следующим способом:
Применение технологии в репродуктивной медицине
Иммуногистохимия в репродуктивной медицине применяется для диагностики причин бесплодия и оценки потенциальной эффективности ЭКО. Известно, что беременность при применении вспомогательных репродуктивных технологий наступает у 35–45 % пациенток после первой попытки. Около 30 % пациенток имеют многократные неудачи, причины которых различны, в том числе неблагоприятное состояние эндометрия.
Долгое время для изучения патологии эндометрия использовался гистологический метод исследования. Однако он не позволял достоверно оценить рецептивную способность эндометрия, что породило потребность в поиске более информативных методов диагностики. Одним из них стала иммуногистохимия, которую в настоящее время используют в следующих целях: