Ифа luis что это
Сифилис. Иммуноферментный анализ на выявление суммарных антител класса M и G к возбудителю сифилиса
Что это за анализ? Это выявление суммарных антител класса M и G к возбудителю сифилиса, которое может использоваться как эффективный сверхчувствительный скрининговый тест для диагностики раннего инфицирования сифилисом.
На данный момент Реакция Вассермана считается устаревшей, и с 2006 года для диагностики сифилиса почти не применяется. Ее заменили более чувствительные и современные анализы. Однако на бланках до сих пор выводят неизменное «RW». Подпись «RW » — это дань традиции, маленькое негласное правило среди врачей: оставляя старую подпись, сейчас имеют в виду новые современные анализы на сифилис.
Какой биоматериал можно использовать для исследования? Венозную кровь
Treponema pallidum (бледная трепонема) – бактерии, которая вызывает сифилис – хроническое венерическое инфекционное заболевание, которое чаще всего передается половым путем, например при прямом контакте с сифилитической язвой (твердым шанкром), также возможно внутриутробное заражение.
Источником инфекции является больной человек. Сифилис легкоизлечим, но грозит серьезными проблемами со здоровьем при бездействии. Инфицированная мать способна передавать заболевание своему плоду, у которого могут развиться серьёзные и необратимые изменения.
Сифилис относят к классическим заболеваниям, передающимся половым путем (венерическим болезням). Возбудитель – бледная трепонема (Treponema pallidum). Сифилис характеризуется медленным прогрессирующим течением. На поздних стадиях он может приводить к тяжелым поражениям нервной системы и внутренних органов
Симптомы сифилиса
Симптомы сифилиса очень разнообразны. Они меняются в зависимости от стадии заболевания. Выделяют три стадии сифилиса:
Первичный сифилис возникает после окончания инкубационного периода. В месте проникновения возбудителя в организм (половые органы, слизистая рта или прямой кишки) возникает безболезненная язва с плотным основанием (твердый шанкр). Через 1-2 нед после возникновения язвы увеличиваются ближайшие лимфатические узлы (при локализации язвы во рту увеличиваются подчелюстные, при поражении половых органов – паховые). Язва (твердый шанкр) самостоятельно заживает в течение 3-6 нед. после возникновения.
Вторичный сифилис начинается через 4-10 нед после появления язвы (2-4 мес. после заражения). Он характеризуется симметричной бледной сыпью по всему телу, включая ладони и подошвы. Возникновение сыпи нередко сопровождается головной болью, недомоганием, повышением температуры тела (как при гриппе). Увеличиваются лимфатические узлы по всему телу. Вторичный сифилис протекает в виде чередования обострений и ремиссий (бессимптомных периодов). При этом возможно выпадение волос на голове, а также появление разрастаний телесного цвета на половых органах и в области заднего прохода (широкие кондиломы).
Третичный сифилис возникает в отсутствие лечения через много лет после заражения. При этом поражается нервная система (включая головной и спинной мозг), кости и внутренние органы (включая сердце, печень и т. д.).
При заражении во время беременности у ребенка возможен врожденный сифилис.
Осложнения сифилиса
По результатам научных исследований, в отсутствие лечения примерно у трети больных развивается третичный сифилис. Примерно четверть больных из-за него погибает. Врожденный сифилис может приводить к тяжелым поражениям или смерти ребенка.
Лечение сифилиса
Достаточно сложное и требует дальнейшего длительного наблюдения. Стоит отметить, что лечение сифилиса на ранних стадиях не представляет особенной сложности с точки зрения выбора препаратов. Особенность бледной трепонемы заключается в том, что она все еще сохраняет чувствительность к пенициллину, который является препаратом выбора при сифилисе.
В случае аллергии на пенициллин назначают антибиотики из ряда макролидов (эритромицин,кларитромицин) или цефалоспоринов (цефтриаксон и тд). Препараты назначаются внутримышечно или в таблетках. Лечение активных форм заболевания проходит в стационарных условиях, пациенты с латентной формой могут получать амбулаторную терапию. Длительность лечения зависит от стадии заболевания и может занимать от нескольких недель до нескольких лет.
Антитела к возбудителю сифилиса
Когда происходит контакт человека с T. pallidum, его иммунная система реагирует, вырабатывая антитела к бактерии. В крови могут быть обнаружены два вида антител к бледной трепонеме: IgM и IgG. В ответ на инфицирование T. pallidum антитела IgM к T. pallidum вырабатываются организмом в первую очередь. Они выявляются у большинства пациентов в конце второй недели заболевания и присутствуют у них в первичную и вторичную стадию. Иммуноглобулины класса G к T. pallidum в определяемых количествах появляются в крови через 3-4 недели после инфицирования. Концентрация их нарастает и на 6-й неделе начинает преобладать над концентрацией IgM, достигая максимума, а затем сохраняется на определённом уровне в течение длительного времени. Начиная с 4-й недели в крови нарастает количество обоих видов иммуноглобулинов, что ведет к положительному результату теста на суммарные антитела к T. Pallidum. Это позволяет использовать данное исследование для ранней диагностики инфицирования T. pallidum. После эффективного лечения концентрация иммуноглобулинов постепенно снижается, но происходит это медленно, в отдельных случаях антитела могут обнаруживаться спустя год и более. От сифилиса можно избавиться с помощью антибиотиков, причём предпочтительно применять производные пенициллина. На ранней стадии заболевание лечится легче и быстрее. Более длительная терапия может понадобиться для пациентов, инфицированных больше года.
Зачем проводится анализ?
Повышение и понижение показателей
Для диагностики сифилиса. Для обследования всех беременных с профилактической целью (желательно на первом приеме гинеколога, при постановке на учет).
Результаты/Норма/Расшифровка анализа
Референсные значения (значения в норме)
Результат: отрицательно. Отношение S/CO (signall/cutoff): 0 — 0,9.
Положительный результат означает, что у пациента недавно приобретённое инфицирование. Вместе с тем отрицательный результат не всегда означает, что у пациента нет сифилиса.
Положительный результат
Положительный результат у ранее серонегативного пациента, а также значительный прирост титров в парных сыворотках, взятых с интервалом 7 дней, говорит о первичной инфекции. Обнаружение антител к трепонеме в крови новорождённого помогает подтвердить диагноз «врождённый сифилис». Кроме того, причиной положительного результата может быть третичный или скрытый сифилис.
Отрицательный результат
Отрицательный результат анализа может свидетельствовать об отсутствии инфицирования или слишком раннем его сроке, когда не выработался иммунный ответ. При этом отсутствие антител у младенца, родившегося от инфицированной матери, не исключает врождённого заболевания, поскольку на момент исследования антитела могут ещё не сформироваться.
Подготовка к сдаче анализа
Не курить в течение 30 минут до сдачи крови
Что может повлиять на результат анализа?
Могут отмечаться ложноположительные результаты при таких заболеваниях, как ВИЧ, болезнь Лайма, малярия, системная красная волчанка, некоторые виды пневмоний, а также при наркомании и беременности. И многие другие соматические заболевания.
Важные замечания
• Сифилис может также передаваться при переливании крови через загрязненные медицинские инструменты, поэтому перед госпитализацией в стационар очень важно проводить обследование.
Иммуноглобулины при сифилисе
Иммуноблот при сифилисе на Джи и М антитела — высокочувствительное, специфичное исследование. Позволяет опровергнуть/подтвердить диагноз при получении неопределенных или позитивных данных, полученных при помощи классических тестов. Отличается информативностью и 99-100% достоверностью.
Метод рекомендован как референтный (максимально точный) при необходимости выполнения дифференциальной диагностики, для подтверждения диагноза латентного сифилиса.
Лабораторная диагностика сифилиса
Серологические исследования базируются на иммунных связях, которые наблюдаются в сыворотке крови.
Белковые соединения сливаются с антигенами, в результате этого взаимодействия антигены микробов купируются.
После внедрения возбудителя (Treponema pallidum) в организме начинают вырабатываться защитные антитела.
Они атакуют микробы и предотвращают распространение болезни.
Для анализа берется кровь, добавляется в нее суспензия микробов.
Если реакция не произошла — человек здоров, произошла — болен.
Иммуноглобулины при сифилисе (иммуноглобулины к бледной трепонеме) — белки-защитники, продуцируемые для его нейтрализации.
Они выявляют инфекцию в крови, ее остатки после проведенной терапии.
Каждый из антител к Treponema pallidum имеет конкретный информативный статус, назначение и конфигурацию.
Иммуноглобулины А при сифилисе
Осуществляют контроль за местным иммунным ответом — ранней защитой, реагирующей на попадание инфекционного агента в определенный сегмент организма.
Производятся в значительной концентрации на слизистых кишечника, легких, полости рта, в незначительной — в крови.
Являются маркером активной инфекции, считаются неспецифическими, поскольку дают ответ и на другие бактерии.
Иммуноглобулины М при сифилисе
Курируют общий иммунитет.
Отличаются слабой специфичностью.
Способствуют эвакуации антигенов, предупреждают их фиксацию в тканях и запуск патологических процессов.
Их наличие указывает на активную стадию заболевания, после лечения эти белки пропадают.
Иммуноглобулины G при сифилисе
Основные иммуноглобулины вторичного иммунитета.
Обеспечивают высокую напряженность иммунного ответа в течение длительного срока.
Клетки памяти этих белков организм способен продуцировать несколько лет после приема профильных лекарственных препаратов.
Что такое титры иммуноглобулинов и как они падают
Титры иммуноглобулинов — термин, применяемый для определения концентраций белковых молекул.
На 4-5 сутки после заражения в крови определяются IgA.
Но вследствие того, что данный период инфекционного процесса выраженной клиники не дает, анализы на них проводятся крайне редко.
Через 7-8 суток после инфицирования клетки плазмы начинают синтезировать IgM.
Белки вырабатываются в первичном/вторичном периоде сифилиса, в третичном — ликвидируются.
Контролировать, как падает их концентрация, очень важно для оценки качества лечения.
Если на протяжении 2-3 недель после их титры снижаются медленно, можно говорить о микробиологической неэффективности назначенной терапии.
Иммуноглобулины класса G появляются спустя 35-40 дней после заражения
Через 55-60 суток их уже можно увидеть в обычных скрининговых анализах.
Когда исчезают из крови иммуноглобулины при сифилисе?
IgM продуцируются 3-4 года после подтвержденной клинической ремиссии.
У некоторых пациентов белок способен выделяться на протяжении всей жизни, что не гарантирует 100% защиты от повторного заражения.
Иммуноглобулины при сифилисе: кто назначает, когда проводится анализ
На анализ могут направить и другие врачи — терапевт, уролог, гинеколог, инфекционист или хирург.
Специфические антитела M появляются через одну-две недели после внедрения возбудителя в организм.
Максимальная концентрация трепонемы фиксируется на 40-60 день, пропадает — спустя 3-5 месяцев после лечебного курса, 12-18 месяцев — без бактериальной терапии.
Выявляются у лиц на первой/второй фазе сифилиса.
Позволяют установить точные сроки заражения.
IgG обнаруживаются на 25-30 сутки патологического процесса.
Их титры постоянно растут, максимальная концентрация отмечается через 2 года после инфицирования.
Особой подготовки тест не требует: перед забором крови пациенту нужно воздержаться от еды и курения 4-5 часов.
От употребления спиртосодержащих напитков — 24 часа.
Показания:
Интерпретация результатов иммуноблота при сифилисе
Положительный результат указывает на недавнее заражение.
Повторный (+) при проведении исследования через 1-1,5 месяца служит подтверждением диагноза сифилис.
Обнаружение IgM у новорожденных младенцев говорит о наличии сифилитической инфекции.
Поскольку плацентарная передача материнских IgM невозможна.
Отрицательный результат предполагает 2 варианта событий: инфицирования не было, анализ был проведен до выраженной реакции иммунной системы.
В сомнительных случаях через 7 дней проводится еще одно тестирование.
Критерии положительности иммуноблота:
Сравнение с другими методами анализов на сифилис
В клинической практике для скринингового (предварительного) обследования на сифилис проводят исследование РМП или улучшенный вариант (РПР).
При положительных данных ставится подтверждающий трепонемный тест — ИФА, РПГА, РИТ (РИБТ), РИФ:
Главное преимущество иммуноблота по сравнению с другими тестами заключается в том, что ответ антиген-антитело не требует дорогих технологий и зависит от массы белка.
Второй плюс — на результат не влияют отсутствие растворимости, нестабильность антигенов.
В анализе есть возможность определить реакцию иммуноглобулинов с несколькими антигенами.
Это имеет большую диагностическую ценность, особенно в сложных случаях.
Тест достаточно прост в исполнении, при необходимости позволяет выявить IgM, IgG изолированно друг от друга.
Ложноположительные и ложноотрицательные анализы на сифилис
Ложные серологические реакции могут быть обусловлены качеством реагентов, погрешностями в ходе выполнения исследования, техническими неточностями.
Ложноотрицательные анализы выдаются при нарушениях сроков хранения приборов для диагностики.
Это влечет за собой снижение чувствительности реакции.
Ложноположительные результаты возникают вследствие ошибок при приготовлении сывороток, неравномерной концентрация антигена, нарушений при заборе крови.
Инфекции/состояния, при которых фиксируются ложноположительные результаты:
Причины ложноотрицательных реакций:
Если тест вызывает сомнения, целесообразно его повторить через 5-10 дней, пройти дополнительные обследования по назначению врача-венеролога.
Для диагностики сифилиса обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.
ИФА и ПЦР: просто о сложных лабораторных методах диагностики инфекций
Опубликовано 29 ноября 2014 пользователем a.ultanbay
В лабораторной диагностике существует множество методов выявления необходимого элемента в биоматериале. Для диагностики инфекционных заболеваний чаще всего используют два принципиально разных метода: ИФА и ПЦР. Мы предлагаем Вам ознакомиться с данными методами, чтоб понять плюсы и минусы каждого из них.
ПЦР – один из самых наукоемких методов. Он обнаруживает ДНК микроорганизма. Генетический материал индивидуален для любого микроба, а это значит, что метод обладает самой высокой специфичностью и не может «обознаться». Принцип ПЦР заключается в том, что в пробирке происходит многократное удвоение искомого генетического кода. В случае присутствия даже незначительного количества этого кода, произойдет увеличение его количества, и анализатор сможет «уловить» его наличие. Таким образом, ПЦР – «золотой стандарт» выявления инфекционных агентов. Однако, у этого метода есть и свои минусы. Во-первых, в отличие от ИФА, ПЦР может сказать о наличии возбудителя только в месте взятия биоматериала, которое ограничено мазком (например, с уретры или из носа). Во-вторых, за счет своей высокой чувствительности, ПЦР может обнаружить даже мертвые частицы микробов, что наблюдается сразу после лечения. В таком случае, результат будет ложноположительный.
Резюмируя вышесказанное, приведем таблицу сравнения этих двух методов друг с другом:
Иммуноферментный анализ
Иммуноферментный анализ (ИФА) — один из видов иммунохимического анализа. Он основан на высокоспецифической иммунологической реакции антигена (АГ) с соответствующим антителом (АТ) с образованием иммунного комплекса. При этом один из компонентов конъюгирован с ферментом. В результате реакции фермента с хромогенным субстратом образуется окрашенный продукт, количество которого можно определить спектрофотометрически.
Любой вариант ИФА содержит 3 обязательные стадии:
В реакции участвуют:
Твердая фаза
В качестве твердой фазы для проведения ИФА можно применять различные материалы: полистирол, поливинилхлорид, полипропилен и другие. Твердой фазой могут служить стенки пробирки, 96-луночные и др. планшеты, шарики, бусины, а также нитроцеллюлозные и другие мембраны, активно сорбирующие белки.
Антигены и антитела
АГ и AT, используемые в ИФА, должны быть высокоочищенными и высокоактивными. АГ должны обладать высокой антигенностью, оптимальной плотностью расположения и количеством антигенных детерминант.
Чувствительность ИФА зависит от концентрации, активности и специфичности используемых антител. Используемые АТ могут быть поли- или моноклональными, различного класса (IgG или IgM) и подкласса (IgG1, IgG2).
Чувствительность и специфичность метода повышается при использовании моноклональных антител. В этом случае появляется возможность обнаруживать низкие концентрации АГ (AT) в образцах.
Ферментные маркеры: наибольшее применение нашли пероксидаза хрена (ПХ), щелочная фосфатаза (ЩФ) и β-D-галактозидаза.
Субстраты
Выбор субстрата, в первую очередь, определяется используемым в качестве метки ферментом, так как реакция «фермент-субстрат» высокоспецифична.
Классификация ИФА
В основу классификации методов ИФА положено несколько подходов:
1 — по типу реагентов, присутствующих на первой стадии ИФА:
2 — по принципу определения исследуемого вещества:
3 — по типу результатов:
Конкурентный ИФА
Конкурентный ИФА для определения антител: искомые антитела и меченые ферментом антитела конкурируют друг с другом за антигены, сорбированные на твердой фазе.
Неконкурентный «сэндвич» – вариант ИФА
Основным достоинством метода является высокая чувствительность, превосходящая возможности других схем ИФА.
Качественный анализ часто используют при скрининговых исследованиях и диагностике инфекционных заболеваний. Результат исследования определяется при сравнении его оптической плотности с расчетной величиной критической оптической плотности (ОПкрит., «Cut-off»).
Формулу для расчета «Cut-off» указывают в инструкции к тест-системе. В расчете «Cut-off» могут участвовать как усредненные значения оптических плотностей положительных и отрицательных контролей, так и оптическая плотность специального контрольного образца — контроля уровня среза.
Если оптическая плотность образца выше, чем Cut-off, образец считается положительным на специфические антитела.
Для полуколичественного варианта проведения методики рассчитывают отношение между средней оптической плотностью образца и оптической плотностью Cut-off.
Образцы рассматриваются как:
Сомнительные результаты анализа нельзя однозначно интерпретировать и для уточнения результата необходимо повторить обследование через 1–2 недели.
Методом ИФА определяют:
Антитела к бледной трепонеме (T.pallidum), сум.
Вы можете добавить к заказу еще тесты в течение 7 дней
Данный тест выявляет суммарные антитела к бледной трепонеме – возбудителю сифилиса, и является наиболее эффективным и чувствительным скрининговым исследованием на данный момент.
Суммарные антитела – это совокупное исследование антител классов IgM и IgG, которые вырабатываются иммунной системой в ответ на контакт с возбудителем болезни. Первыми при заражении T. Pallidum (бледная трепонема) появляются IgM. Их можно выявить уже на второй неделе заболевания. Иммуноглобулины класса G обнаруживаются позже, через 3-4 недели после контакта с инфекцией, однако сохраняются в организме на определенном уровне в течение длительного времени (до года и более). Максимальная концентрация IgG наблюдается на 6-й неделе болезни, когда они начинают преобладать над IgM.
Анализ на бледную трепонему суммарно дает положительный результат начиная с 4-й недели болезни, когда в крови выявляется достаточное количество обоих видов иммуноглобулинов. Благодаря этому данный тест можно использовать для ранней диагностики сифилиса. При успешной терапии концентрация антител класса IgG снижается, но антитела не исчезают. Антитела IgG сохраняются в крови в течение долгого времени, поэтому после успешного лечения перенесенного заболевания рекомендованы контрольные исследования, включающие нетрепонемные тесты (например, RPR (микрореакция на сифилис качественно).
В каких случаях обычно назначают исследование?
Что именно определяется в процессе анализа?
Проводится суммарное определение концентрации антител к бледной трепонеме в крови иммунохемилюминесцентным методом.
Что означают результаты теста?
Тест не используется для контроля эффективности терапии, так как антитела могут годами сохраняться в крови больного, перенесшего сифилитическую инфекцию ранее, лечившегося и здорового в настоящий момент.
Тест может давать ложноположительный результат: при невенерических трепонематозах и спирохетозах; а также у больных с аутоиммунными заболеваниями, лепрой, онкологическими заболеваниями, эндокринной патологией и при некоторых других заболеваниях.
Сроки выполнения теста.
Результат исследования можно получить через 1-2 дня после сдачи анализа.
Как подготовиться к анализу?
Следует придерживаться общих правил подготовки к взятию крови из вены. Кровь можно сдавать не ранее, чем через 3 часа после приема пищи в течение дня, или утром натощак. Чистую воду можно пить в обычном режиме.