мясо сырое при бактериоскопии считают несвежим если в мазках отпечатках в поле зрения обнаруживают
Бактериоскопия мазков-отпечатков
Покраска по Грамму:
После этого промывают, сушат и просматривают под иммерсией не менее 5 полей зрения в каждом мазке. Выводят среднее арифметическое и производят оценку мяса на свежесть.
Мясо считают свежим, если в мазках отпечатках не обнаружена микрофлора или в поле зрения препарата видны единичные (до 10 клеток) кокки и палочковидные микробные клетки и нет следов распада мышечной ткани.
Мясо считают сомнительной свежести в том случае, если в поле зрения мазка-отпечатка обнаружено не более 30 кокков или палочек, а также следы распада мышечной ткани: ядра мышечных волокон в состоянии распада, исчерченность волокон слабо различима.
Мясо считают несвежим, если в поле зрения мазка-отпечатка обнаружено свыше 30 кокков или палочек, наблюдается значительный распад тканей: почти полное исчезновение ядер и полное исчезновение исчерченности мышечных волокон.
Следует заметить, что при исследовании мяса на свежесть практически ценные результаты получают при проведении пробой варки мяса полной готовности. Варят куски мяса весом 200-250г. в кастрюле с закрытой крышкой. После чего устанавливают запах бульона, его вкус, состояние жира. Затем устанавливают запах мяса вгорячем и остывшем состоянии с поверхности и на разрезе, а также устанавливают цвет мяса. При оценке вкуса вареного мяса особое внимание уделяют наличию неприятного или постороннего привкуса, горечи и т.д. При оценки состояния жира определяют наличие признаков осаливания прогоркания. Признаки сенсорных показателей различной степени свежести мяса приведены в таблице №1
Органолептические показатели мяса и субпродуктов.
Мясо сырое при бактериоскопии считают несвежим если в мазках отпечатках в поле зрения обнаруживают
1.1. Микрофлора свежего мяса
На мясоперерабатывающих предприятиях микробиологическое исследование мяса и мясных продуктов проводят с профилактической целью или как вынужденное, когда требуется выявить в мясе присутствие патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, а также при подозрении на нарушения в ходе технологического процесса. Микробиологическому исследованию подвергают сырье, готовые изделия, а также тару, инвентарь, руки рабочих, непосредственно связанных с мясной продукцией.
Микроорганизмы, как правило, не содержатся в крови, мышечной ткани и во внутренних органах здоровых животных, организм которых обладает высокой сопротивляемостью к их проникновению. Существуют два пути контаминации органов и тканей животных микроорганизмами: эндогенный и экзогенный.
Эндогенная контаминация мяса микробами наблюдается у животных, больных инфекционными болезнями, что представляет большую опасность для человека, а также у ослабленных и утомленных животных. У животных, убитых в стадии резкого утомления, микроорганизмы содержатся практически во всех органах и тканях.
Экзогенная контаминация мяса и органов микроорганизмами происходит после убоя в процессе последующих операций (снятие шкуры, разделка и нутровка туши) и в ходе заключительной обработки мяса.
Бактериологическое исследование мяса и мясопродуктов проводится для предупреждения:
• заражения рабочих, занимающихся убоем скота и переработкой мяса;
• допуска в пищу мяса и мясопродуктов, полученных от животных, имевших инфекционные заболевания;
• выпуска в реализацию продуктов, употребление которых может вызвать у людей пищевые токсикоинфекции или токсикозы, а также распространение инфекций.
Микробиологические анализы осуществляют в бактериологической лаборатории предприятия в соответствии с действующими ГОСТами или нормативно-технической документацией. Микробиологическое исследование свежего мяса начинают с микроскопического исследования мазков-отпечатков (бактериоскопический метод), а затем проводят бактериологический анализ.
1.2. Бактериоскопическое исследование мяса
Отбор проб. Для определения свежести мяса от каждой туши или полутуши отбирают для исследования три образца массой не менее 200 г каждый целым куском из мышц бедра, лопатки и области 4-5 шейных позвонков. В образцах, кроме мышечной ткани, должны быть сухожилия и жир.
Для исследования на листериоз направляют головной мозг, долю печени и почку.
При исследовании полутуши и четверти туши берут кусок мышцы, лимфатические узлы и трубчатую кость.
Каждый образец упаковывают отдельно в пергаментную бумагу, ставят дату, место взятия проб, вид животного, номер туши, причину и цель исследования и отправляют в лабораторию.
Бактериоскопическое исследование мяса проводят в случае расхождения результатов между биохимическими и органолептическими методами оценки. Необходимость в бактериоскопическом исследовании свежести мяса отпадает в случае отрицательного результата при органолептическом анализе.
Из каждой пробы мяса необходимо приготовить не менее двух мазков-отпечатков.
Для приготовления мазка-отпечатка из поверхностного слоя (на глубине 2-3 см) стерильными ножницами или скальпелем вырезают кусочек мяса массой 2-3 г, прикладывают его внутренней срезанной стороной к предварительно профламбированной поверхности предметного стекла.
Для приготовления мазков-отпечатков из глубоких слоев поверхность пробы мяса необходимо сначала простерилизовать (смочить спиртом и обжечь на пламени или прижечь нагретым металлическим шпателем). Затем стерильным инструментом вырезать из глубины небольшие кусочки мяса размером 2 x 1,5 x 2,5 см и сделать мазки-отпечатки.
Приготовленные на предметных стеклах мазки-отпечатки необходимо высушить на воздухе, зафиксировать в пламени горелки или спиртовки и окрасить по методу Грама. Каждый мазок-отпечаток просмотреть под микроскопом с иммерсионным объективом не менее чем в 25 разных полях зрения.
При микроскопировании подсчитывают отдельно число клеток бактерий (кокков и палочек) и дрожжей в каждом просмотренном поле зрения, результатом является среднее значение общего количества клеток по двадцати пяти полям зрения. Отмечают также наличие или отсутствие следов распада мышечной ткани в поле зрения микроскопа. Результаты микроскопирования оценивают в соответствии с данными, представленными в табл. 1.1.
Таблица 1.1. Оценка результатов бактериоскопического анализа мяса
Отсутствуют микробные клетки или видны единичные кокки и дрожжи (до 10 клеток); следов распада мышечной ткани нет
С частично измененной свежестью
Не более 30 кокков, дрожжей или палочковидных клеток; заметны следы распада мышечной ткани (ядра мышечных волокон в состоянии распада, исчерченность мышечных волокон слабо различима)
Более 30 микробных клеток с преобладанием палочковидных форм; наблюдается значительный распад мышечной ткани, почти полное исчезновение ядер и исчерченности мышечных волокон
Примечание. При обнаружении в мазках-отпечатках грамположительных палочек с обрубленными концами последние окрашивают 2 %-м раствором сафранина. Наличие в мазках, окрашенных сафранином, палочек или цепочек с капсулами свидетельствует о присутствии возбудителя сибирской язвы.
1.3. Бактериологическое исследование мяса
1.3.1. Определение общего количества микроорганизмов (КМАФАнМ)
По 1 см 3 каждого разведения засевают в чашки Петри с заранее маркированной крышкой и заливают 10 — 15 см 3 расплавленного и остуженного до температуры 40 — 45 °С мясопептонного агара (МПА). Сразу после заливки агара содержимое чашек Петри тщательно перемешивают путем легкого покачивания для равномерного распределения посевного материала. После застывания агара чашки Петри переворачивают крышками вниз и ставят в таком виде на 72 ч в термостат с температурой 37 °С.
По окончании культивирования подсчитывают количество выросших на чашках с МПА колоний. При этом используют лупу с увеличением в 4 — 10 раз или пользуются специальным прибором для подсчета колоний. При большом числе колоний и их равномерном распределении в агаре на дно чашки Петри наносят четыре или более одинаковых секторов, подсчитывают число колоний в двух-трех секторах (но не менее чем на 1/3 поверхности чашки), находят среднее арифметическое число колоний и умножают на общее количество секторов всей чашки.
Количество мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов в 1 см3 свежего мяса (X) вычисляют по формуле
1.3.2. Определение бактерий группы кишечной палочки (БГКП)
Метод определения БГКП основан на обнаружении образования газа или кислоты в элективной питательной среде, содержащей лактозу (среды Кесслера, Хейфеца, Кода). Метод учета БГКП получил название бродильного метода, сущность которого заключается в посеве определенного количества продукта или его разведений в жидкую питательную среду с последующим инкубированием при температуре 37 °С и обнаружении в поплавках газа с изменением цвета среды.
При обнаружении газа в пробирках на втором этапе исследования, производят пересев материала из забродивших пробирок на среду Эндо. Пересев делается бактериологической петлей густым штрихом для получения изолированной колонии. Чашки Петри с посевами инкубируют при температуре 37 °С в течение 24 ч, затем посевы просматривают. На среде Эндо БГКП вырастают, образуя яркокрасные блестящие колонии с металлическим блеском (или без него).
При отсутствии на среде Эндо характерных для БГКП яркокрасных колоний с металлическим блеском или без него дают отрицательный ответ на наличие кишечных палочек и исследование прекращают. При обнаружении на среде Эндо типичных для БГКП колоний устанавливается принадлежность выросших микроорганизмов к семейству кишечных бактерий. Для этого проводят тест на оксидазу (для БГКП она должна быть отрицательной). Затем из колоний, характерных для кишечных палочек, готовят фиксированный препарат, окрашивают его по Граму и микроскопируют. Под микроскопом должны обнаруживаться мелкие грамотрицательные палочки с закругленными концами. В этом случае ответ на присутствие БГКП в продукте считается положительным.
1.3.3. Обнаружение бактерий рода Proteus
Присутствие в свежем мясе бактерий рода Proteus в больших количествах свидетельствует о наличии гнилостного разложения мясных белков.
Для обнаружения протея в мясе и мясопродуктах проводят посев по Шукевичу: соскоб с поверхности свежего разреза исследуемого образца вносят в конденсационную воду свежескошенного МПА в пробирках, не касаясь поверхности среды. Пробирки в вертикальном положении помещают на 18-24 ч в термостат с температурой 37 °С. Наличие на среде в пробирках вуалеобразного налета, при микроскопировании которого обнаруживают подвижные палочки, отрицательно окрашивающиеся по Граму, указывает на присутствие протея в исследуемых образцах.
Биохимические свойства видов бактерий рода Proteus приведены в табл. 1.2.
Таблица 1.2. Биохимические свойства бактерий рода Proteus
Микробиологическое исследование свежего мяса
Микробиологическое исследование свежего мяса начинают микроскопического исследования мазков-отпечатков (бактериоскопический метод), а затем проводят бактериологический анализ.
Отбор проб. Для определения свежести мяса от каждой туши или полутуши отбирают для исследования три образца массой не менее 200 г каждый. Отбор производится целым куском из мышц бедра, лопатки и области 4–5 шейных позвонков. В образцах, кроме мышечной ткани, должны быть сухожилия и жир.
При бактериологическом исследовании на сибирскую язву направляют лимфатический узел, собирающий лимфу с места локализации пораженного очага, отечную ткань, а у свиней, кроме того, подчелюстной лимфатический узел.
Исследование на листериоз проводят на головном мозге, доле печени и почке.
При исследовании полутуши и четверти туши берутся кусок мышцы, лимфатические узлы и трубчатая кость.
Каждый образец упаковывают отдельно в пергаментную бумагу, где обозначаются дата и место взятия проб, а также вид животного, номер туши, причина и цель исследования. Затем образец отправляется в лабораторию.
Бактериоскопическое исследование
Бактериоскопический (микроскопический) метод – совокупность способов обнаружения и изучения морфологических и тинкториальных свойств бактерий (микробов) в лабораторных условиях. В лабораторной практике используют следующие типы микроскопических препаратов: препарат-отпечаток, висячую каплю, раздавленную каплю, тонкий мазок, фиксированный мазок.
Бактериоскопическое исследование мяса проводят в случае расхождения результатов между биохимическими и органолептическими методами оценки. Необходимость в бактериоскопическом исследовании свежести мяса отпадает в случае отрицательного результата при органолептическом анализе.
Из каждой пробы мяса необходимо приготовить не менее двух мазков-отпечатков.
Для приготовления мазка-отпечатка из поверхностного слоя (на глубине 2–3 см) стерильными ножницами или скальпелем вырезают кусочек мяса массой 2–3 г, прикладывают его внутренней срезанной стороной к предварительно профламбированной поверхности предметного стекла.
Для приготовления мазков-отпечатков мяса из глубоких его слоев поверхность пробы необходимо сначала простерилизовать (смочить спиртом и обжечь на пламени или прижечь нагретым металлическим шпателем). Затем стерильным инструментом вырезать из глубины небольшие кусочки мяса размером 2×1,5×2,5 см и сделать мазки-отпечатки.
Приготовленные на предметных стеклах мазки-отпечатки необходимо высушить на воздухе, зафиксировать в пламени горелки или спиртовки и окрасить по методу Грама. Каждый мазок-отпечаток просмотреть под микроскопом с иммерсионным объективом не менее чем в 25 разных полях зрения.
При микроскопировании в каждом просмотренном поле зрения подсчитывают отдельно число клеток бактерий (кокков и палочек) и дрожжей, результатом является среднее значение общего количества клеток по двадцати пяти полям зрения. В поле зрения микроскопа отмечается также наличие или отсутствие следов распада мышечной ткани.
Результаты микроскопирования оценивают в соответствии с данными, представленными в табл. 10.
Отсутствуют микробные клетки или видны единичные кокки и дрожжи (до 10 клеток); следов распада мышечной ткани нет
С частично измененной свежестью
Не более 30 кокков, дрожжей или палочковидных клеток; заметны следы распада мышечной ткани (ядра мышечных волокон в состоянии распада, исчерченность мышечных волокон слабо различима)
Более 30 микробных клеток с преобладанием палочковидных форм; наблюдается значительный распад мышечной ткани, почти полное исчезновение ядер и исчерченности мышечных волокон
Примечание. При обнаружении в мазках-отпечатках грамположительных палочек с обрубленными концами последние окрашивают 2 %-м раствором сафранина. Наличие в мазках, окрашенных сафранином, палочек или цепочек с капсулами свидетельствует о присутствии возбудителя сибирской язвы.
Бактериоскопия мазка
Описание исследования
Одним из лабораторных методов исследования является бактериоскопия, т.е. наблюдение за бактериями под микроскопом. Он широко применяется для диагностики инфекции или гнойного воспаления, в условиях диспансера, а также для исследования гинекологических мазков.
а также такие данные, как:
Гинекологические мазки считаются нормальными, если флора представлена грамположительными палочками, называемыми при выдаче результата лактоморфотипами. Так, при бактериальном вагинозе (инфекционном, не воспалительном заболевании), лактофлора резко уменьшается. Вместо нее появляется кокобациллярная (смесь бацилл и кокков – бактерий, формой напоминающих шар) грамвариабельная (наличие в мазке как грамположительных, так и грамотрицательных бактерий) флора.
При рассматривании мазка, взятого у пациентов с гонореей, наблюдается наличие неокрашенных кокков, напоминающих по форме бобы. Они могут располагаться как в клетках, так и вне них.
Иные состояния, сопровождающиеся гнойным воспалением, характеризуются присутствием в мазках грамположительных коков и грамотрицательных палочек. При этом обращается также внимание на количество лейкоцитов, а также есть ли в исследуемом материале клетки эпителия, ключевые клетки.
Исследование мокроты заключается в выявлении:
Мазки, взятые из ран, обычно содержат грамположительные кокки.
При всей очевидной пользе бактериоскопии, данный вид исследования не дает информации о названии бактерий. Чтобы определить их род и вид, проводится бактериологический посев.
Для исследования отбираются следующие пробы:
Подготовка к исследованию
Подготовка к сдаче биологического материала осуществляется согласно рекомендации лечащего врача.
Рекомендации по сбору мокроты
Биоматериал собирается в медицинский контейнер до начала лечения противомикробными/иммуномоделирующими препаратами или через 12-14 дней после его окончания. Для исследования необходимо собрать утреннюю мокроту, отошедшую при кашле. Чтобы избежать попадания в пробу посторонних примесей и «представителей» микрофлоры рта, перед откашливанием необходимо почистить зубы, тщательно выполоскать рот кипяченой водой. Также избегать попадания в образец слюны и носоглоточной слизи.
По разрешению врача для лучшего отделения слизи накануне можно применить отхаркивающее средство.
Контейнер с мокротой плотно закрывается крышкой во избежание ее вытекания. Емкость используется только стерильная и пустая (без транспортировочных сред). Хранится контейнер в холодильнике при температуре от +2 до +8⁰С. Время доставки от момента сбора – не более 4 часов. Желательно, чтобы мокрота была охлажденная, но не замороженная!
Отбор пробы в урогенитальном тракте
Получение корректного результата исследования зависит от правильности отбора материала. Одно из основных условий – использование для процедуры стерильных одноразовых инструментов, отдельно предназначенных для каждого вида обследования.
Не рекомендуется за один раз отбирать мазки и пробы для ПЦР-обследования, т.к. при этом страдает качество отбираемого материала. При невозможности по форс-мажорным обстоятельствам перенести взятие пробы для исследования на разные дни, соблюдается определенная последовательность проведения анализов: посев (микробиологические исследования), мазок (бактериоскопия), метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)/цитология (исследование клеток).
Подготовка к отбору пробы из урогенитального тракта
1. Биоматериал отбирается не ранее, чем через 48 часов после:
2. Пробы не берутся во время менструации.
3. Накануне и в день обследования нельзя спринцеваться.
4. Отбор пробы для посева на флору осуществляется не ранее чем через 10 дней после проведения антибактериальной и местной антисептической терапии и минимум через 30 дней после курса оральных антибиотиков.
5. Перед обследованием не мочиться женщинам в течение 3 часов, мужчинам – в течение полутора-двух часов.
Требования к подготовке отбора пробы для тестирования посредством жидкостной цитологии:
Важно. Если на шейке матки явно видна патология, то мазок берется независимо от менструального цикла, прохождения лечения и прочих факторов, перечисленных выше в первых 4-х пунктах.
Показания к исследованию
Интерпретация исследования
При просмотре мазка специалист обращает внимание на следующие детали:
В мазках возможно присутствие следующих типов бактерий:
Микроскопическая картина мазков интерпретируется с учетом:
В гинекологических мазках количество эпителиальных клеток не имеет значения при диагностике и поэтому не учитывается.
Лейкоцитарная реакция оценивается по количеству единиц в поле зрения и интерпретируется следующим образом:
Большое и умеренное количество лейкоцитов служит индикатором наличия воспаления.
Количество микрофлоры оценивается следующим образом:
Посев рекомендуется в следующих случаях:
Не рекомендуется или необязательно проводить посев:
Бактериоскопическое исследование окрашенного мазка ( по Граму)
Где проводится: Во всех медицинских центрах и лабораториях «Тонус»
Срок выполнения: 1-2 рабочих дня
Бактериоскопия (Бактериоскопическое исследование окрашенного мазка по Граму) – это метод, в основе которого лежит исследование бактерий под микроскопом. Это быстрый метод диагностики, который широко используется врачами разных специальностей при подозрении на наличие бактериального инфекционного процесса.
Важно понимать, что бактериоскопическое исследование окрашенного мазка по Граму является не совсем специфичным методом, и для полноценной идентификации возбудителя, а также, определения его чувствительности к антибиотикам, необходимо проведение бактериального посева.
Бактериоскопия широко используется как в терапии, так и в акушерско-гинекологической практике.
В зависимости от типа, бактерии можно разделить на Грам положительные и Грам отрицательные. Есть ряд бактерий, которые не имеют специфической окраски по Граму. В зависимости от расположения в организме (заселения тех или иных слизистых оболочек и органов), спектр бактерий меняется.
Например, при исследовании гинекологических мазков, нормальной флорой являются грамположительные палочки (лактоморфотипы). При возникновении инфекционного процесса, данный тип бактерий, как правило, угнетается и активизируетс рост условно-патогенной и патогенной микрофлоры. При бактериальном вагинозе, как правило, имеет место коккобацилярная грамвариабельная микрофлоры. При гонорее в мазке будут присутствовать грамотрицательные кокки бобовидной формы, расположенные парами (по типу «кофейных зерен»). При других гнойных заболеваниях (не отличающихся специфичностью клиники и возбудителя), при микроскопии, в зависимости от этиологии, встречаются как грамположитеьные, так и грамотрицательные палочки. Помимо выявления возбудителя, в мазке учитывается наличие клеток эпителия, количество лейкоцитов, присутствие ключевых клеток.
Если в качестве исследуемого материала используется мокрота, то обычно, в ней находят грамположитеьные кокки, морфологически сходные с пневмококками, либо мелкие неодинаковой формы палочки, грамотрицательные кокки.
В мазке из раны чаще всего встречаются грамположительные кокки.
Таким образом, материалом для бактериоскопического исследования могут быть:
Так как бактериоскопическое исследование не позволяет с высокой точностью определить возбудителя, после него необходимо проведение бактериологического посева содержимого на флору.
Бактериоскопическое исследование окрашенного мазка по Граму позволяет врачу быстро сориентироваться в большом количестве возможных возбудителей и выбрать антибактериальный препарат для стартовой терапии, обладающий таким спектром, чтобы воздействовать на определнную группу бактерий, так как посев на флору требует нескольких дней для получения результата, а начать лечение необходимо непосредственно по факту обращения пациента за помощью.
Условия подготовки к проведению бактериоскопического исследования окрашенного мазка по Граму определяется лечащим врачом и обусловлено тем, в какой области будет производиться забор биологического материала.
Важно проводить исследование до начала антибактериальной терапии.
Показанием к проведению бактериоскопического исследования окрашенного мазка по Граму является наличие инфекционно-воспалительного процесса различной локализации (мочеполовой системы, легких и дыхательных путей, ЛОР-органов, глаз, слизистых оболочек любой локализации, раневых поверхностей и т.д.).
Основной целью данного исследования является выявление бактерий.
По результатам исследования выдается заключение, в котором отражено: наличие или отсутствие бактерий, тип бактерий (грамположительные, грамотрицательные и т.д.), оценка лейкоцитарной реакции (количество лейкоцитов), количественная оценка микрофлоры, другие возможные клеточные изменения.